Los controles internos en casi cualquier experimento son esenciales para garantizar que las condiciones experimentales para cada muestra sean idénticas, y que el experimento pueda reproducirse con precisión con alta significancia. Estos eliminan cualquier fuente de ruido de fondo que pueda estar presente debido a diferencias en el tamaño de la muestra, la preparación de la muestra, etc.
Los controles internos de amplificación en qRT-PCR tienen el mismo propósito. Un control adecuado le permite normalizar sus resultados incluso si tiene diferentes tamaños de muestra o eficiencia de extracción de ADN / ARN de las muestras. Hay algunas cosas que deben tenerse en cuenta al elegir qué gen debe usarse como CI:
- Los niveles de expresión endógenos del gen IC idealmente deberían ser similares a los niveles de expresión del gen objetivo que se está estudiando (en muestras de tipo salvaje, por supuesto).
- Los niveles de expresión del gen IC deben ser consistentes en los diferentes tipos de células / tejidos que desea comparar. Esto se debe a que algunos genes IC que se usan típicamente pueden mostrar diferentes patrones de expresión entre diferentes tipos de tejidos. Esto puede modificarse utilizando más de un gen IC.
¿Cuándo deberías usar controles internos? Siempre. Por cada muestra individual. Particularmente cuando obtienes niveles de expresión fuera de lo común; Los circuitos integrados básicamente le dicen a todos los demás en la sala que no estás falsificando tus nuevos datos interesantes.
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