¿Cuáles son las limitaciones de los microscopios confocales de escaneo láser?

confocal es una herramienta poderosa, pero tiene algunas limitaciones. Aquí hay 3 rápidos:

1. velocidad
un confocal típico usa escaneo de trama , lo que significa que escanea la muestra punto por punto . En comparación con una detección de campo amplio (tomando una instantánea de todo el campo de visión), es bastante lenta. por supuesto, puede hacerlo más rápido comprometiendo la sensibilidad, la resolución, etc., y hay una implementación especial de confocal (como confocal de disco giratorio) para resolver este problema.

2. resolución axial
si ha realizado una pila z en confocal, probablemente haya notado que tiene una resolución axial relativamente baja (z res) en comparación con su resolución lateral (xy res). típicamente, la resolución axial es 2 ~ 3 peor que la resolución lateral.

3. daño de la foto
en lugar de iluminar un plano específico (sección óptica), confocal ilumina toda la columna a lo largo de su eje z. Las muestras pueden ser dañadas por la foto. Esto se aplica a cualquier exploración larga.

4. solo una nota en la hoja de luz (microscopía de fluorescencia de hoja de luz)
recientemente, la microscopía de lámina de luz surgió como una nueva solución de imagen para biología del desarrollo, biología de sistemas, etc.

Dependiendo de la implementación, tiene muchos beneficios como:

  • puede lograr una resolución isotrópica
  • múltiples órdenes de magnitud más rápido que confocal (la hoja de luz utiliza detección de campo amplio)
  • solo ilumina un plano específico que se está escaneando, por lo que disminuye significativamente la exposición a fotos

WF: campo amplio, LSFM: microscopía de fluorescencia de hoja de luz, CF: confocal