En general, cuanto más limpio mejor. La razón de esto es porque el ADN extraído puede tener contaminantes, como proteínas, polifenoles y polisacáridos, y estos pueden interferir con la replicación del ADN. Es probable que estos inhiban la reacción, por lo que solo obtendrá una mancha o nada en absoluto. Si la concentración de los contaminantes es subóptima para la inhibición, pueden causar la formación de moléculas quiméricas a través de un fenómeno llamado enlace de cebadores mediado por polimerasa o PHLOP. Aquí las extensiones de los cebadores no están completas, de modo que se pueden generar nuevos cebadores dentro del área objetivo. Este es un problema particular si se usa ADN ambiental como plantilla y el gen objetivo es medio repetitivo, como los genes de ARN ribosómico. La eliminación de contaminantes asegura que esto no suceda. Existen métodos rápidos y sucios, como la PCR de colonias, que funcionan bien cuando se extrae ADN de E. coli, pero no necesariamente los usaría al amplificar ADN de otros organismos o entornos.
¿Necesito ADN limpio para un análisis de PCR? ¿Por qué?
Related Content
¿Qué es el foto-blanqueo en microscopía?
¿Por qué necesita desnaturalizar una proteína antes de someterla a tripsinolisis?
¿Qué cosas puedo hacer en la escuela secundaria que me ayuden a tener éxito en biología?
¿Cuáles son algunos ejemplos de motivos bifan en redes reguladoras celulares?
¿Cuál es el dogma central de la biología molecular? ¿Qué procesos están involucrados?
Eso depende: si desea estar absolutamente seguro de obtener un buen producto de PCR, es posible que desee asegurarse de que el ADN esté limpio de contaminantes que interferirían con la amplificación (el hemo de la sangre puede inhibir la PCR, por ejemplo). Por otro lado, como otros han notado, dependiendo de las circunstancias, puede amplificar muestras “sucias” si una banda simple / sin banda es todo lo que le interesa.
TL: DR: depende de los resultados que intente obtener.
Realmente ayuda. La PCR es algo gracioso. Dependiendo de la plantilla y los cebadores, a veces puede hacer PCR en barro (Nota: exagerado para el efecto cómico). Por otro lado, a veces puedes hacer PCR en las muestras más limpias y limpias, y simplemente no funciona hasta que modifiques un poco las condiciones. Muchas cosas pueden afectar la forma en que las interacciones hacen que la PCR funcione, funcionen, y dado que los ingredientes son, en el mejor de los casos, caros y, en el peor de los casos, irremplazables, probablemente sea aconsejable reducir tanto como sea posible, cualquier cosa que pueda interferir con Tu éxito. Entonces, supongo que le daría una calificación definitiva, calificada, tal vez sobre eso. Puede o no “necesitar” una muestra limpia, pero realmente no lo sabrá hasta que lo pruebe. Por otro lado, ciertamente “quieres” una muestra limpia, por las razones que acabo de explicar en la larga oración anterior.
Realmente depende de lo que estés haciendo. Si está tratando de aislar el ADN de una muestra específica para amplificar, entonces sí es probable que desee una muestra tan pura como sea posible para no amplificar el ADN aleatorio “basura” de otra parte. Como dijo Julia, ¡tal vez!
respuesta: tal vez!
pruébelo sin purificar y vea cómo sale el gel. Si las bandas no son claras, purifíquelo. Es difícil decir lo contrario sin más información.
More Interesting
¿Qué dilemas éticos enfrentamos con el sistema de edición de genes CRISPR / Cas9?
¿Cuándo CRISPR / Cas9 se convertirá en la corriente principal?
¿Qué tan accesibles son los AGEs (como el glucosapano) en las fibrillas de proteínas reticuladas?
¿De qué microbio obtuvo la célula humana sus mitocondrias?
¿No van los cambios epigenéticos contra el dogma central?
Biología Molecular: ¿mejores prácticas para un recién llegado?
¿Se puede conectar el aparato de Golgi al retículo endoplásmico o debe existir solo?
¿Qué es una quinona en términos simples?
¿Cuál es la función de la terapia génica?
¿Qué es una analogía entre la regulación genética y una fábrica?
