¿Cuál es el mejor protocolo para la extracción total de ARN?

Este es un debate interminable en biología molecular, porque lo mejor para una aplicación no es lo mejor para otra. Muchos de los kits que elijas tienen que ver con la matriz de la que extraes el ARN (por ejemplo, células de mamíferos, células vegetales, bacterias). Para mi trabajo en el océano (cuantificación de ARNm y transcripción inversa), continuamente tengo la mejor suerte con el kit de aislamiento de miARN mirVana. Me parece que el tampón de lisis es extremadamente bueno; No estoy seguro de en qué consiste, pero uno de los ingredientes principales es el fenol ácido.

Las otras razones por las que me gusta este kit son un poco más vudú, como suele ser el caso en biología molecular. (¿Cuáles son los hábitos más extraños en biología molecular?). Mis rendimientos siempre son mayores con este kit, y creo que es porque la columna de sílice tiene una mayor eficiencia de captura (siempre ejecuto el extracto dos veces); También me gusta la elución de dos fases con agua libre de nucleasa 95 C.

Comparé el rendimiento y la calidad del ARN de Trizol, el kit Ambion, el kit de otro proveedor y el kit Qiagen RNeasy. El kit Qiagen ganó con diferencia. Mejor rendimiento y mejor calidad. No es adecuado para todas las aplicaciones, pero para el ARN total es genial.