Puedes buscar fácilmente en Google, de todos modos, aquí está la respuesta.
Los cinco pasos involucrados en la toma de huellas digitales de ADN en medicina forense son los siguientes: 1. Loci y alelos VNTR 2. Preparación de la muestra de ADN 3. Perfiles de ADN 4. Interpretación de los resultados.
1. VNTR Loci y alelos:
- ¿Cómo sobrevive el ADN durante miles o millones de años en un fósil?
- ¿Los WASP tienen el 100% de la genética proveniente de Europa, específicamente del Reino Unido? Si hacen una prueba de ascendencia, ¿el 100% de su ADN será europeo?
- ¿Es posible que un chimpancé y un humano se hibridicen, ya que el 98% del ADN (aproximadamente) es el mismo?
- ¿Qué porcentaje de ADN comparten los humanos con los dinosaurios?
- ¿Qué tan importante es el ADN para la vida?
El sitio específico en el que está presente una secuencia VNTR constituye un locus VNTR. Los diferentes alelos de este locus consisten en diferentes números de la unidad repetitiva de esta secuencia VNTR. Por ejemplo, un minisatélite tiene una unidad de repetición de 64 pb; Este minisatélite muestra una variación considerable en la población humana en términos del número de repeticiones en tándem (oscilan entre 10 y 18; Tabla 13.15).
El locus VNTR humano más polimórfico es el locus MSI (D1S7); el número de repeticiones en tándem en este locus varía de 200 a más de 2,000, la unidad de repetición es GTGGAYAGG, donde Y representa una pirimidina, a saber, T o C.
La variación en el número de repeticiones en tándem surge debido al cruce desigual. La tasa de cruce en el ADN de minisatélites es bastante alta (-10
por kb de ADN), es decir, ~ 10 veces mayor que la tasa de recombinación homóloga durante la meiosis. A veces, la presencia de un minisatélite está correlacionada con una alta tasa de intercambio, incluido el intercambio de cromátidas hermanas, en las proximidades.
Los diferentes alelos de un locus VNTR se detectan como RFLP o mediante PCR. La RFLP se detecta al digerir el ADN genómico con una enzima de restricción que escinde el ADN fuera de la región de las repeticiones de VNTR en ambos lados. Idealmente, la enzima debería cortar el ADN cerca de los extremos de la secuencia VNTR; en cualquier caso, no debe dividirse dentro de la secuencia VNTR. Los laboratorios forenses en Europa usan Hinf1, mientras que los de EE. UU. Prefieren usar HaeIII.
Esto genera los fragmentos VNTR de diferentes longitudes dependiendo del número de repeticiones presentes en los alelos en cuestión. Estos fragmentos migran a diferentes posiciones en el gel electroforético. La ubicación de las bandas se detecta utilizando la secuencia VNTR como sonda. Esto permite la determinación inequívoca de la fuente de cada alelo en la progenie, haciendo que la determinación de los parentescos y el establecimiento de identidades sean notablemente confiables (Fig. 13.11).
Una familia de minisatélites en el genoma humano tiene una ‘secuencia central común’ de 10-15 pb; esta secuencia es rica en GC y los residuos G se concentran en una cadena. Cada minisatélite individual tiene una variante de la secuencia central, que es capaz de detectar alrededor de 1,000 minisatélites diferentes en la transferencia Southern. La variación en los loci individuales (-1,000 loci) crea un patrón único para cada individuo, que es la base para el uso de minisatélites en las huellas digitales de ADN.
Los microsatélites ahora se usan como marcadores basados en PCR. Para esto, se determina la secuencia de ADN único ubicado en ambos lados de una repetición y se usa para construir dos cebadores de PCR para las regiones únicas flanqueantes. Estos cebadores se usan para la amplificación por PCR de la repetición mini o microsatélite; Se espera que el producto de amplificación sea de diferentes longitudes en diferentes individuos y se detecte como bandas distintas después de la electroforesis en gel.
2. Preparación de la muestra de ADN:
Las fuentes comunes de ADN incluyen sangre, semen, tejidos sólidos, manchas de sangre, manchas de semen, células bucales de las raíces capilares de la saliva, etc. Las muestras deben almacenarse en condiciones limpias, secas y frescas para minimizar la contaminación por microorganismos y la degradación del ADN debido a la DNasa. .
3. Perfiles de ADN:
El ADN se analiza sobre la base de RFLP (hibridación de sonda) o PCR. Los análisis RFLP son de los siguientes dos tipos: (1) análisis de polimorfismo multilocus (MLP) y (2) análisis de polimorfismo de locus único (SLP). Los análisis de PCR también son de los dos tipos siguientes: (1) análisis STR y (2) mapeo de repetición de variante de minisatélite (MVR).
4. Interpretación de resultados:
En el caso del método MLP, las bandas del ADN recuperado de la escena del crimen se comparan con las del ADN del sospechoso. Experimentos anteriores han demostrado que la posibilidad de que dos individuos no relacionados tengan una banda en común es 0.25.
Por lo tanto, la probabilidad de que dos personas compartan el perfil MLP completo será de 0.25
, donde n es el número total de bandas claramente visibles y coincidentes en el perfil. En la figura 13.12, el perfil de ‘acusado’ coincide completamente con el obtenido de ‘semen recuperado de la víctima’. El perfil tiene 17 bandas distintas a juego; por lo tanto, la probabilidad de que el acusado no sea el criminal real será de 0.25
(= uno en -16.4 mil millones).
En el caso de los análisis SLP, es necesario medir los pesos moleculares (en kb) de las bandas coincidentes; La mayoría de los laboratorios utilizan un escáner de video computarizado para detectar los centros de las bandas y compararlos con las bandas de marcadores de control conocidas. Los valores de peso molecular de las bandas coincidentes no deberían diferir en más de un margen de error predeterminado.
La frecuencia de cada locus de peso molecular se calcula para cada alelo de cada locus SLP analizado; esto se basa en los datos obtenidos de los perfiles (si hay varios cientos de individuos no relacionados. La probabilidad de que la coincidencia completa en todos los loci SLP se deba al azar solo se estima multiplicando las frecuencias de los alelos en cuestión de cada uno de los loci.
Una representación esquemática de las huellas digitales de ADN de una persona acusada de violación y de la mancha de semen recuperada de la ropa de la víctima de violación. Las huellas digitales coinciden perfectamente; La probabilidad de que esto se deba al azar es extremadamente baja. Las muestras de ADN de la víctima y de una persona no relacionada también se incluyen para comparación. El patrón de bandas en los carriles de las víctimas y personas no relacionadas difiere de las de los “acusados” y “semen recuperados de la ropa de las víctimas”; Las diferentes bandas están marcadas con flechas.