Como preguntó sobre los ensayos basados en PCR, trataré de explicar un ensayo de PCR simple para verificar la mutación. Lo mantendré lo más breve posible. No estoy usando ninguna imagen para representar nada. Si no puedes entenderlo, avísame. Entonces intentaré publicar fotos aquí.
Esto lo usamos para validar una mutación conocida en un paciente o un organismo modelo.
Imagine una mutación en un gen de tamaño, digamos 500 pb. Una mutación puede ser una indel, o una sustitución o cualquier cosa.
- ¿Por qué usamos una escalera de ADN?
- ¿Cómo mide nuestro ADN el tiempo?
- ¿Cómo saben los científicos si un par de bases es A, T, C o G?
- ¿Para qué se usan los genes en el ADN?
- ¿El kit de ADN de ascendencia determina su ascendencia reciente o simplemente una ascendencia antigua?
Digamos que tenemos una adición de 5 bases en el par de bases 350 en nuestro gen.
Diseñamos 2 juegos de imprimaciones. Un conjunto de cebador interno en los extremos del gen; el otro, cebadores externos alrededor del sitio de mutación en el gen (que abarca la base 350).
Entonces, cuando se produce la reacción pcr, en la muestra de control, obtendrá 3 bandas con tamaños de 50 pb, 350 pb y 500 pb. Pero en la muestra mutada, uno de los cebadores no puede unirse a la plantilla debido a la adición de 5 pb. Entonces, solo veremos 2 bandas, en lugar de 3 bandas.
Otra forma es hacer solo 3 cebadores. Dos en los extremos del gen y un cebador con las bases mutadas. Entonces, después de pcr, obtendrá solo una banda en la muestra de control porque el tercer cebador con las bases mutadas no puede unirse al ADN WT. Mientras que la muestra positiva para la mutación te dará dos bandas.
Si desea encontrar la mutación, entonces la única opción es a través de la secuenciación. Puede hacer una secuenciación sanger y comparar las secuencias con la de los padres o ir a la secuenciación de la próxima generación.
