¿Qué quieres decir con PCR?

PCR-reacción en cadena de la polimerasa

En pocas palabras, es un protocolo utilizado para amplificar una secuencia particular de ADN de interés de cualquier fuente, y esto se basa en la capacidad de la ADN polimerasa para sintetizar una nueva cadena complementaria de ADN. Y para elegir la secuencia de interés para que la ADN polimerasa actúe, se requiere un cebador para guiar la ADN polimerasa para agregar el primer nucleótido para comenzar el proceso de replicación.

COMPONENTES REQUERIDOS PARA PCR:

Plantilla de ADN: es la secuencia de ADN que se utiliza como secuencia de ADN original para amplificar la secuencia de interés.

Primers: actúa como guía para la ADN polimerasa. Es una pieza corta de ADN monocatenario y permite que la ADN polimerasa agregue su primer nucleótido a la secuencia de ADN deseada. Hay dos tipos de cebadores cebadores hacia adelante y hacia atrás.

dNTP (trifosfatos de desoxinucleótidos): estas son las unidades individuales de las bases A, T, G, C. Estos son utilizados por la ADN polimerasa para construir una nueva cadena de ADN.

ADN polimerasa: es una enzima que sintetiza la cadena complementaria de la secuencia deseada de ADN. No puede comenzar a sintetizar por sí solo. Puede agregar nucleótidos en la dirección 5′-3 ‘a la cadena preexistente, por lo tanto, usamos cebadores para iniciar la replicación.

PROTOCOLO:

Desnaturalización: el ADN de cualquier fuente se desnaturaliza primero (la naturaleza bicatenaria se destruye) al proporcionar temperaturas elevadas de aproximadamente 95 ° C que conducen a la separación de la cadena.

Recocido: también conocido como etapa de cebado de cebado. los cebadores están unidos al ADN en la secuencia de interés. Los cebadores están diseñados de tal manera que son complementarios a la secuencia de interés en el ADN parental. El cebador directo se une a la secuencia de ADN con la secuencia 3′-5 ‘y el cebador inverso se une a la secuencia de ADN con la secuencia 5′-3’.

Extensión: ahora la ADN polimerasa entra en acción y comienza a agregar nucleótidos para replicar el ADN. En la PCR se usa un tipo especial de ADN polimerasa y tiene la capacidad de resistir altas temperaturas. La ADN polimerasa más utilizada es la ADN polimerasa Taq (aislada de Thermis aquaticus ), la ADN polimerasa pfu (aislada de Pyrococcus furiosus) es ampliamente utilizada debido a su alta fidelidad al copiar ADN.

Amplificación: El ciclo mencionado anteriormente se repite una y otra vez para lograr los amplicones de la secuencia deseada de ADN.

PCR significa reacción en cadena de la polimerasa y es extremadamente importante para los biólogos moleculares.

Las muestras de ADN vienen en todas las cantidades. El problema es con los pequeños. Entonces, lo que hace esta reacción es amplificarla mil millones de veces más o menos, lo que facilita que un biólogo molecular estudie la muestra.

Pero para estudiar una muestra, primero debe desenrollar la hélice, y para hacerlo, necesita una temperatura alta (aproximadamente 90 grados Celsius). Pero la mayoría de las enzimas (que son cadenas de proteínas, se pliegan sobre sí mismas. Estos pliegues crean bolsas donde las moléculas de sustrato se unen y reaccionan para formar un producto), incluida la ADN polimerasa, se desnaturaliza o se despliega a una temperatura tan alta, haciéndolas inútiles. Para combatir este problema, utilizamos una enzima especial, “Taq polimerasa”, que se extrae de Thermophilus aquaticus, una bacteria que vive en aguas termales y géiseres (no en el hogar, los naturales). La polimerasa Taq funciona a altas temperaturas.

La PCR implica tres pasos:

  1. Desnaturalización: esto ocurre a aproximadamente 90 grados (todas mis temperaturas están en grados Celsius). La doble hélice de ADN se desenrolla para dar dos hebras separadas.

2) Recocido: Esto es a aproximadamente 60 grados, donde unimos cebadores, que son secuencias cortas de oligonucleótidos que ayudan a la ADN polimerasa a iniciar la replicación del ADN, ya que no puede hacerlo por sí sola.

3) Extensión: Esto es a unos 70 grados, donde la polimerasa Taq entra en la imagen y replica la cadena completa, utilizando los nucleótidos que le proporcionamos.

Esos pequeños guiones dispersos son los nucleótidos que proporcionamos (los bloques de construcción del ADN). Y la polimerasa Taq lo está usando para replicar cada hebra.

Podemos repetir esto para cualquier número de ciclos para obtener nuestra amplitud deseada.

PCR ( P olymerase C hain R eaction) es un método revolucionario desarrollado por Kary Mullis en la década de 1980. La PCR se basa en el uso de la capacidad de la ADN polimerasa para sintetizar una nueva cadena de ADN complementaria a la cadena de plantilla ofrecida. Debido a que la ADN polimerasa puede agregar un nucleótido solo a un grupo 3′-OH preexistente, necesita un cebador al que pueda agregar el primer nucleótido. Este requisito hace posible delinear una región específica de secuencia de plantilla que el investigador quiere amplificar. Al final de la reacción de PCR, la secuencia específica se acumulará en miles de millones de copias (amplicones).

La plantilla de PCR es la reacción en cadena de la polimerasa. Proporciona un método simple e intrínseco para la amplificación exponencial de secuencias de ADN específicas mediante síntesis in vitro . Esta técnica ha permitido sintetizar grandes cantidades de fragmentos de ADN sin su clonación. Es ideal cuando la cantidad de muestras biológicas disponibles es muy baja, como un solo fragmento de cabello o una pequeña muestra de sangre que queda en el lugar del delito.

La técnica de PCR requiere lo siguiente:

  1. Plantilla de ADN
  2. Imprimaciones
  3. Enzima.

La enzima más común utilizada es una enzima termoestable Taq Polimerasa aislada de Thermus aquaticus, una bacteria termoestable.

PCR significa reacción en cadena de la polimerasa. En este proceso, el polímero (ADN) se amplifica, lo que significa que se forman múltiples copias de ADN a partir de 1 o pocas moléculas de ADN con la ayuda de la enzima polimerasa, dNTP, cebadores, etc.

PCR = reacción en cadena de la polimerasa

PCR ( reacción en cadena de la polimerasa ): la PCR ( reacción en cadena de la polimerasa ) es una técnica en genética molecular que permite el análisis de cualquier secuencia corta de ADN (o ARN) incluso en muestras que contienen solo pequeñas cantidades de ADN o ARN. La PCR se utiliza para reproducir (amplificar) secciones seleccionadas de ADN o ARN para su análisis.

La PCR se refiere a la reacción en cadena de la polimerasa. Esta es una herramienta biotecnológica que ayuda en la amplificación del ADN deseado que ha sido modificado genéticamente.

El ADN genéticamente modificado también se conoce como ADNr o ADN recombinante.

PCR (reacción en cadena de la polimerasa): la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica en genética molecular que permite el análisis de cualquier secuencia corta de ADN (o ARN) incluso en muestras que contienen solo pequeñas cantidades de ADN o ARN. La PCR se utiliza para reproducir (amplificar) secciones seleccionadas de ADN o ARN para su análisis.

Se llama como reacción en cadena de la polimerasa, la máquina que se utiliza para emular este proceso se llama termociclador, a veces también se llama PCR

Reacción en cadena de la polimerasa, por la cual podemos obtener una gran cantidad de una muestra de ADN o secuencia de ARN. Se usa en ELISA, DNA FINGERPRINTIG