¿Por qué es importante la amplificación de ADN?

Si al decir AMPLIFICACIÓN DE ADN te refieres a la técnica de amplificación a través de PCR o RT-PCR, el propósito puede ser diferente.

Espero que ya sepas cómo funciona la PCR (el uso de un cebador directo e inverso que se unirá a una sola cadena y desencadenará esa ecc de polimerización de cadena).

Para que pueda amplificar para muchos propósitos:

  1. Para ver si su secuencia de interés está ahí: si ve productos de amplificación, puede decir que la secuencia que le interesa está allí. Si hace esto para investigar si su mRNa de interés se expresa, entonces es un RT-PCR
  2. Para ver si su secuencia de interés también se conserva en otro organismo o tejido: diseñe cebadores de baja rigurosidad que se unirán a la secuencia que es n% similar a su secuencia.
  3. Agregar marcador (como indicador / secuencia reconocida por las semillas, por ejemplo, avidina): puede diseñar su cebador que lleve consigo la secuencia o secuencia GFP / LacZ reconocida por el anticuerpo (HA, por ejemplo).
  4. Agregar secuencia de sitio de restricción: nuevamente puede diseñar su cebador para que contenga la secuencia que será escindida por la enzima de restricción (por ejemplo, EcoR1, BamH1 ecc)
  5. Para identificar regiones flanqueantes: si está utilizando un elemento transponible para inducir la mutación (por ejemplo, está utilizando el elemento P) y desea ver la secuencia cerca de su elemento P (por ejemplo, después de un Trapeo de Emhancer) puede usar un PCR inverso

Espero que esté claro (y lo que estaba pidiendo), si necesita alguna aclaración, escriba a continuación.

Hay innumerables respuestas a esta pregunta. O, para decirlo de otra manera, hay tantas o más respuestas a esta pregunta como aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), por la cual Mullis recibió el premio Nobel.

La respuesta general básica es que debido a que una sola molécula de ADN es tan pequeña que se encuentra más allá de los límites de detección de la mayoría de los ensayos, si no todos. Incluso con radioisótopos sensibles, sería difícil, si no imposible, detectar una sola molécula de ADN. La razón por la que la PCR fue tan importante y revolucionaria para la biología molecular es que un resfriado comienza con una sola molécula de material de partida y la amplifica a una cantidad adecuada para su posterior análisis, que incluye, entre otros:

Aplicaciones de PCR:

Prueba genética

huella genética

Generación de sonda (p. ej. para transferencia o microscopía)

tipificación de patógenos

tipificación de tejidos

secuencia ADN

Mutagénesis de ADN

clonación molecular

mapeo genético

…Y la lista continúa.

Es importante porque de solo una copia de una molécula de ADN obtienes millones de ella, y cuando tienes millones de copias de ella, las pruebas son más efectivas y fáciles de hacer.