¿El ADN obtenido de la extracción de bricolaje no puede procesarse a través de la PCR?

gracias por el A2A – difícil de comentar sin información completa de qué o cómo la persona había hecho su trabajo (solo decir que la persona siguió el método X no es útil, mejor si la persona pudiera describir paso a paso lo que realmente hizo) . Actualmente, me pregunto si bien puede haber transferido algo de ADN (digamos una hebra) al microtubo, pero cuando recogió 3 micro litros del tubo (¿había fragmentos de ADN en esos 3 micro litros?)

Las cadenas de ADN no son fragmentos de ADN.

Una sugerencia es que realice una división de la enzima de restricción en las cadenas de ADN que transfirió a los microtubos (antes de extraer un pequeño volumen para realizar la PCR).

Solo una idea para su consideración.

Otra cosa para intentar es usar el método simple de bricolaje para extraer el ADN de las células de las mejillas y ver si el resto del proceso le da algunos resultados. Si este segundo método resulta en algo para PCR, es muy probable que el “golpeteo” anterior no rompa las paredes celulares del material vegetal para llegar al ADN.

Incluso si el ADN se purificó por el método más sofisticado , no garantiza una amplificación por PCR , dado que el método de PCR no se ha estandarizado. Además, el protocolo de bricolaje utiliza reactivos domésticos comunes que no son muy eficientes y puros. Entonces, realmente no puedo decir por qué la amplificación por PCR falló hasta y a menos que haya CONTROL (S).

La razón puede estar contaminada con etanol, si es el caso, deje que el ADN recogido del tubo de etanol se seque hasta que sea invisible (o 10 minutos a temperatura ambiente) y luego lo resuspenda en agua. Es menos probable que la proteína contaminada sea la razón, con una PCR optimizada, incluso el extracto crudo de las hojas de los árboles o una gota de sangre funcionará porque la mayoría de las proteínas se desnaturalizarán a altas temperaturas de la reacción de PCR. Otras razones pueden ser la condición de PCR, intente cambiar la temperatura y el tiempo de alineación, una concentración de plantilla más baja o más alta.