Cómo moldear un gel de agarosa para la extracción de ADN

La electroforesis en gel de agarosa se realiza para visualizar el ADN de acuerdo con su movilidad a través de la matriz de agarosa. En algunos casos se puede usar para aislar un fragmento de ADN de cierto tamaño extrayendo el ADN del gel después de la electroforesis. Supongo que esta es la información que desea de su pregunta. Lanzar un gel de agarosa es sencillo. Algunos científicos usan una temperatura de fusión baja si la extracción de ADN es el propósito de la electroforesis. Primero prepare el tampón de electroforesis. Los más utilizados son TAE (Tris-HCl, ácido acético y EDTA) o TBE (Tris-HCl, ácido bórico y EDTA). TAE se compone a 50 veces la concentración de carrera y TBE, 10 veces la concentración de carrera. Luego, pese la agarosa. La cantidad necesaria dependerá del tamaño del fragmento a extraer y del tamaño del gel. Si desea extraer un fragmento de 1000 pares de bases, un gel al 2% p / v debería ser suficiente. Un gel de tamaño mediano debe ser de aproximadamente 50 ml. Pese 1 g de agarosa y póngalo en un matraz de 250 ml. Agregue 1x tampón de electroforesis y hierva la mezcla con remolinos regulares para evitar que la agarosa se asiente. Puede hacerlo en un microondas o calentándolo sobre un mechero Bunsen. Tenga cuidado, sin embargo, la agarosa fundida estará caliente. Una vez que esté fundido, déjelo enfriar a unos 60 grados C. Mientras se enfría, prepare la plataforma de gel. Esto implica sellar los extremos de la plataforma con cinta adhesiva y colocar un peine en un extremo de la plataforma; esto es para formar los pocillos en el gel donde se cargará el ADN. Cuando la agarosa se haya enfriado, viértala lentamente sobre la plataforma sellada y déjela reposar. Cuando esté listo, retire la cinta en los extremos de la plataforma y colóquelo todo en la cámara de electroforesis llena con 1x tampón de electroforesis, luego retire el peine. El gel ahora está listo para cargar. Una vez que se carga el ADN, se electroforesis a 120 V durante una hora. Después de la electroforesis, retire el gel de la cámara y manche con bromuro de etidio (un carcinógeno conocido, así que use guantes cuando lo manipule). Tomar con agua (NB puede agregar bromuro de etidio al gel antes de moldearlo si lo desea). Vea el ADN bajo luz UV usando un Transiluminador. La longitud de onda de los rayos UV debe ser de 260 nm. Para extraer el ADN, corte la banda deseada del gel y coloque la agarosa en un micro tubo estéril. Calentar la mezcla para derretir la agarosa y luego extraer con fenol. El ADN estará en la fase acuosa. Puede comprar kits donde la mezcla se pasa a través de una columna para extraer ADN.