La respuesta corta es sí, siempre que el YAC esté dentro de la célula de levadura, sigue el ciclo mitótico de replicación, condensación y separación en las células hijas.
Entonces, los YAC son ADN crudo cuando se manejan in vitro, fuera de la célula. Pero dentro del núcleo de la levadura, los YAC se comportan como cromosomas de levadura nativos: reclutan histonas, se reparan cuando se rompen y, en ocasiones, se transcriben en ARNm.
De lo contrario, las histonas no son los factores principales para la condensación cromosómica durante la mitosis, aunque los cromosomas mitóticos sí contienen histonas. Los cromosomas metafásicos están llenos de condensinas, que no están presentes en los cromosomas interfásicos.
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Los YAC pueden ser lineales o circulares, pero los YAC circulares tienen un uso más extendido, ya que pueden separarse fácilmente de los cromosomas lineales del huésped. Tienen un centrómero de levadura que se unirá a los microtúbulos del huso mitótico durante la telofase.
Los YAC se replican si contienen suficientes ARS (secuencias de replicación autónoma), que están marcados por motivos de secuencia que reclutarán el ORC (complejo de reconocimiento de origen) que inicia la replicación del ADN. El motivo ARS es 5′- T / ATTTAYRTTTT / A -3 ‘, y es bastante frecuente en el genoma humano, por lo que el ADN humano se replicará fácilmente en la levadura.
A diferencia de los HAC (cromosomas artificiales humanos), los YAC no se usan para expresar un gen ‘extraño’ en la levadura. Como la levadura carece de los factores de transcripción humanos que se necesitan para expresar la mayoría de los genes humanos, es poco probable que los genes en YAC se transcriban. Pero incluso si algunas secuencias se transcriben al azar, estos ARNm probablemente no serán traducidos, sino que serán destruidos y reciclados.
Cuando el contenido de ADN se extrae de las células de levadura (antes de su uso, por ejemplo, para la secuenciación), se debe purificar de proteínas, ARNm y ADN lineal. De esta manera, el ADN de levadura nativa puede separarse del ADN circular del YAC.
En el siguiente documento se ofrece una descripción actualizada, detallada y precisa del protocolo para extraer y purificar YAC circulares:
VL Noskov y col., Nature Protocols 6, 89–96 (2010)
http://www.nature.com/nprot/jour…
El texto completo está detrás de un muro de pago, una versión gratuita se puede encontrar aquí:
http://download.bioon.com.cn/upl…
Con respecto a la creación de YAC y su introducción en las células de levadura, este documento se refiere al método TAR (recombinación asociada a la transformación en levadura), descrito en detalle en el documento de V Larionov et al: PNAS vol 94, 7384–7387, 1997, ver http://www.pnas.org/content/94/1… y referencias allí.
La clonación de TAR en YAC circulares se usó en la creación del primer genoma sintetizado químicamente (M. genitalium), como se describe en el famoso artículo de Gibson et al, Science 319, 1215 (2008).
Una versión de libre acceso de este documento está disponible en http://www.marcottelab.org/users…
