¿Por qué se usa ADNc en lugar de ARNm al evaluar la expresión génica?

Hay múltiples razones:

  1. El ARN es fundamentalmente mucho menos estable que el ADN. Las ARNas están presentes de forma ubicua y existe una gran probabilidad de que su ARN se degrade. Además, el manejo del ARN requiere cierta experiencia técnica. Además, las RNAses son mucho más difíciles de inactivar que las DNAses.
  2. Para usar PCR, nuestros métodos están optimizados para amplificar ADN y no ARN. Por lo tanto, el ARN necesita ser transcrito de manera inversa al ADN para poder amplificarse.
  3. El número de moléculas de ARN en su muestra puede no ser lo suficientemente grande como para detectarlo directamente. La transcripción inversa los ayudará a amplificar los números que su análisis podría recoger.
  4. Además, si está realizando un análisis RNAseq, la tecnología de secuenciación actual se ha optimizado para la detección de ADN en lugar de la detección de ARN.

Espero que esto aclare su consulta!

Las respuestas dadas son buenas, pero vale la pena señalar que la pregunta es defectuosa ya que existen múltiples técnicas de monitoreo de expresión génica que no usan ADNc. Ejemplos: la tecnología High Throughput Genomics es una versión de protección RNase; NanoString es un ensayo de hibridación puro y Oxford Nanopore está lanzando un kit de secuenciación directa de ARN.

Lo mismo dice Anupam Prakash. Y una vez que revierte la transcripción de ARNm a ADNc, puede amplificarla exponencialmente mediante PCR y tener suficiente para trabajar. Esto es especialmente necesario si desea investigar la expresión génica en una sola célula para evitar el ruido y el promedio que se ve al comenzar con un lisado de tejidos.

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