Asumiré que cuando dices “ancho”, quieres decir algo como nitidez o cuán “apretada” es la banda, en lugar de difusa o difusa.
Hay tres posibles razones para la falta de nitidez, o una mancha, de una banda en la electroforesis. De acuerdo, tal vez más de tres, pero aquí están probablemente los más importantes.
- Inhomogeneidad: si el ADN en la banda no es exactamente igual, pero es tan similar que el gel no puede resolverlo en sus componentes, verá una falta de nitidez.
- Sobrecarga: si hay tanto ADN en la muestra que físicamente no puede caber en los poros en una región estrecha del gel, se colará. Eso es probablemente lo que es responsable de la apariencia irregular y gruesa de las bandas en Lane 2 y Lane 3.
- Tamaño pequeño: las moléculas muy pequeñas (en comparación con los poros del gel) pueden moverse en todas las direcciones por difusión, independientemente del campo eléctrico. Una banda de desenfoque en el extremo de migración más rápida del electroferograma podría deberse a la difusión.
Ahora, en cuanto al brillo, generalmente es aproximadamente proporcional a la cantidad de macromolécula en la banda, suponiendo que todas las macromoléculas en la muestra respondan igualmente a la mancha. Concentraciones más altas tendrán un brillo localmente mayor. En general, su ojo se ve afectado por las diferencias de brillo más que por la nitidez, por lo que una banda brillante y afilada podría parecer que tiene más ADN que una banda más débil y sin nitidez.
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Recuerde también que a medida que lee el electroferograma, las bandas que migraron más lejos son más pequeñas y, por lo tanto, tendrán menos masa de ADN, suponiendo que el marcador tenga cantidades equimolares en cada banda. Sin embargo, algunos marcadores tienen cantidades adicionales a propósito en algunas bandas, por lo que es más fácil saber qué banda es cuál.
