Para la traducción de ARNm, algunos requisitos son esenciales:
- Ribosomas
- ARNm, ARNt, ARNr
- GTP, Magnesio como cofactor, ATP, iones de potasio
- Aminoácidos
- Los factores de iniciación, alargamiento y terminación.
- Aminoacil transferasa enzima sintetasa
Aunque proporcionamos estas necesidades en los microtubos para llevar a cabo la traducción, el proceso no funcionará como la transcripción “in vitro”. Resulta que necesita el ambiente celular interno para progresar.
Por lo tanto, para que se produzca la traducción in vitro, necesitamos sistemas libres de células. Este es aquel en el que se usan los lisados celulares y no las células vivas.3 sistemas: lisado de reticulocitos de conejo, extracto de germen de trigo y sistemas libres de células de E. coli. .
En esto, el extracto celular se obtiene al lisar la célula y centrifugar la pared celular, el ADN genómico y otros componentes como el ARNm celular (ya que tenemos nuestro ARNm deseado con nosotros). El lisado restante tiene los otros requisitos mencionados anteriormente. con ambiente celular interno.
Las limitaciones con esto son que no tiene éxito con todas las proteínas, es costoso y solo puede hacerlo un experto en condiciones de laboratorio.
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