Cuando se expresa el sgRNA en un sistema CRISPR-cas9, ¿por qué es necesario tener un promotor RNA Pol III en sentido ascendente?

No estoy seguro de cuán estrictamente necesario es, pero parece funcionar mejor. RNA Pol III transcribe una gran cantidad de genes de “mantenimiento” que básicamente siempre se expresan a un alto nivel, lo cual es deseable aquí. Además, sus productos típicos son ncRNA cortos, como rRNA o tRNA, que son mucho más similares a sgRNA que los ARNm codificadores de proteínas más largos. Creo que es bastante estándar usar promotores Pol III para expresar ARN pequeños (específicamente el promotor U6 para ARN guía), [1] [2] y una búsqueda rápida en Google parece sugerir que las personas lo han estado haciendo desde al menos 2002. [3 ]

Exactamente por qué Pol III es mejor para sintetizar estos ARN más cortos es una pregunta diferente que no tengo idea de cómo responder, pero es suficiente decir que la maquinaria de transcripción es de alguna manera más especializada para expresar mejor estas secuencias.

Notas al pie

[1] Página CRISPR de Zhang Lab

[2] Guía CRISPR / Cas9

[3] http://www.nature.com/nbt/journa…