La mayoría de los kits de RT-PCR vienen con dos juegos de cebadores:
- Oligo-dT : estos son exactamente como suenan: muchos dT (generalmente alrededor de 20). Estos están destinados a unirse a las colas poli (A) de los ARNm . Los cebadores anclados en oligo que especifique en su pregunta son simplemente oligo-dT seguidos de dos dN aleatorios para evitar el cebado dentro de la cola poli (A).
- Cebadores aleatorios: generalmente son de 6-10 mers que consisten en secuencias aleatorias. Estos pueden cebarse con casi todos los tipos de ARN que se extraen, incluidos ARNm, ARNt, ARNr, ARN viral, etc. La desventaja de usar cebadores aleatorios es que producen ADNc más cortos debido al cebado dentro de la plantilla.
Entonces, dependiendo del tipo de secuencias de ADNc que desee, debe usar los siguientes cebadores:
- Amplificación de ARNm: utilice oligo-dT o pruebe un cebador inverso específico de ARNm. También he oído hablar de una combinación de cebador aleatorio oligo-dT + que funciona bien para esta aplicación, pero personalmente no la he probado, así que no puedo decir por su eficiencia.
- Amplificación de ARN total: use cebadores aleatorios, o tal vez una mezcla aleatoria de cebador + oligo-dT podría funcionar también.
Si desea usarlo para otras aplicaciones, hágamelo saber e intentaré actualizarlo en la publicación.
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