Bueno, cuán preciso debe ser depende completamente de lo que está haciendo y por qué. Supongo que si estás contando colonias, quieres un número exacto, de lo contrario solo mirarías tu plato y dirías “mayormente azul” o “mayormente blanco”, ¿no?
Debe colocar diluciones en serie hasta que tenga un buen número contable en cada placa. El factor de dilución dependerá del recuento de ufc en su muestra inicial: 1: 1000 puede no ser suficiente. Debes apuntar a estar en algún lugar en el rango de 30-300 colonias / placas, ya que esto tiende a ser “contable” … también notarás que tu desarrollo de color azul debido a la escisión de X-gal será más claro si las colonias no son todas demasiado abarrotados o demasiado diluidos.
Si está haciendo este experimento muchas veces, puede valer la pena determinar la relación entre el OD600 de su material de partida y el número de unidades formadoras de colonias (ufc) presentes. Tome la medición OD600 (en varias muestras diferentes) y diluciones en serie de placas y evalúe su muestra (esto no necesariamente debe hacerse en medio indicador X-gal). Comprender esta relación le dará una buena idea de qué dilución colocar en el plato cuando está haciendo su recuento de colonias azul / blanco.
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Otro consejo, al menos para el trabajo de E. coli: dejar las placas a 4 grados C durante la noche puede ayudar a visualizar el producto de escisión X-gal. No estoy seguro si esto funciona para otros organismos, pero podría valer la pena intentarlo. Por supuesto, también recuerde que X-gal es sensible a la luz y mantenga sus platos almacenados en la oscuridad / envueltos en papel de aluminio, no lo “cocine” agregándolo al agar fundido cuando esté demasiado caliente, etc. conceptos básicos de una buena técnica, estoy seguro de que ya los conoces, ¡pero solo menciono por si acaso!
