Dependiendo de cuántas enzimas de digestión esté usando, su plásmido se cortará en una cierta cantidad de piezas. Por lo general, se usan dos enzimas de digestión para que tenga un vector y un inserto como se muestra en la imagen a continuación:
Antes de agregar las enzimas, debe saber aproximadamente cuántos pares de bases tendrá cada pieza una vez que todo esté cortado. Cuanto más pequeño es el fragmento de ADN, más lejos viaja a través de los poros del gel de agarosa. Asegúrese de colocar una escalera en uno de los pozos como punto de referencia. Si su enzima no digiere completamente el plásmido, la mayoría del ADN no se moverá muy lejos a través del gel y habrá una barra gruesa hacia el punto de partida.
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Por ejemplo:
Cada banda es ADN de cierta longitud de pares de bases de largo. Cuanto más gruesa es la banda, más ADN tienes de ese tamaño. Si su banda de ADN está muy cerca del punto de partida, lo más probable es que sus enzimas de restricción no se corten y tenga plásmidos completos.
La electroforesis en gel le permite separar sus piezas de ADN por tamaño y / o confirmar que sus enzimas de restricción funcionaron. Si no tiene las piezas deseadas de ADN que desea a pesar de agregar las enzimas de digestión correctas, intente dejar que se incuben un poco más antes de ponerlas en el gel.
Espero que esto haya ayudado 🙂
