Los rayos UV son mutágenos … Estoy de acuerdo, pero en la electroforesis en gel después de la tinción con bromuro de etidio, para aplicar fluorescencia a este colorante, se debe usar UV. El bromuro de etidio es un carcinógeno muy fuerte (agente cancerígeno), por lo tanto, tenga cuidado al manipularlo.
Aquí los rayos UV se usan en menor intensidad y la frecuencia de mutación es muy menor. También depende del propósito de la extracción … si es para terapia génica, entonces la mutación individual también sería indeseable.
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La electroforesis en gel es un método para la separación y análisis de macromoléculas (ADN, ARN y proteínas) y sus fragmentos, en función de su tamaño y carga. Se usa en química clínica para separar proteínas por carga y / o tamaño (agarosa IEF, esencialmente independiente del tamaño) y en bioquímica y biología molecular para separar una población mixta de fragmentos de ADN y ARN por longitud, para estimar el tamaño de ADN y ARN fragmentos o para separar proteínas por carga.
Las moléculas de ácido nucleico se separan aplicando un campo eléctrico para mover las moléculas cargadas negativamente a través de una matriz de agarosa u otras sustancias. Las moléculas más cortas se mueven más rápido y migran más lejos que las más largas porque las moléculas más cortas migran más fácilmente a través de los poros del gel. Este fenómeno se llama tamizado. Las proteínas se separan por carga en agarosa porque los poros del gel son demasiado grandes para tamizar proteínas. La electroforesis en gel también se puede utilizar para la separación de nanopartículas.
La electroforesis en gel utiliza un gel como medio anticonvectivo y / o medio de tamizado durante la electroforesis, el movimiento de una partícula cargada en un campo eléctrico. Los geles suprimen la convección térmica causada por la aplicación del campo eléctrico, y también pueden actuar como un medio de tamizado, retrasando el paso de moléculas; Los geles también pueden servir simplemente para mantener la separación final, de modo que se pueda aplicar una tinción posterior a la electroforesis. La electroforesis en gel de ADN generalmente se realiza con fines analíticos, a menudo después de la amplificación de ADN a través de PCR, pero se puede usar como una técnica preparatoria antes del uso de otros métodos como espectrometría de masas, RFLP, PCR, clonación, secuenciación de ADN o transferencia Southern para caracterización adicional.
PARA VISUALIZACIÓN:
Una vez que se completa la electroforesis, las moléculas en el gel pueden teñirse para hacerlas visibles. El ADN puede visualizarse usando bromuro de etidio que, cuando se intercala en el ADN, fluoresce bajo luz ultravioleta, mientras que la proteína puede visualizarse usando una mancha de plata o un colorante azul brillante de Coomassie. También se pueden usar otros métodos para visualizar la separación de los componentes de la mezcla en el gel. Si las moléculas a separar contienen radiactividad, por ejemplo en un gel de secuenciación de ADN, se puede registrar un autorradiograma del gel. Se pueden tomar fotografías de geles, a menudo utilizando un sistema Gel Doc.
