¿Qué hace el isopropanol en la extracción del ADN?

La extracción y purificación de ADN es básicamente un proceso de 3 pasos.
1. Explote las celdas, liberando todo el contenido.
2. Deshazte de todo lo que no sea ADN
3. Beneficio!
Quiero decir,
3. Retire el ADN del tampón de extracción y disuélvalo en tampón de almacenamiento o agua.
El alcohol entra en el paso 3. En ese punto, se ha eliminado la proteína y los restos celulares, y cualquier ARN restante es presumiblemente solo fragmentos cortados. Desea obtener el ADN de su sopa de sal y ponerlo en algún tipo de solución tamponada para el almacenamiento, o incluso en agua. La forma más sencilla de hacerlo es mezclarlo con alcohol, lo que hace que el ADN se precipite de la solución. No se preocupe por los detalles de eso: a los fines del trabajo de laboratorio, los mecanismos son menos importantes que la receta del libro de cocina. Solíamos usar alcohol etílico helado hasta una concentración de aproximadamente el 70%, y algo de sal agregada (generalmente una solución de acetato), pero eso también tiende a reducir la cantidad de sal, que en el mejor de los casos necesita un lavado adicional. Hoy en día utilizamos alcohol isopropílico a temperatura ambiente sin la sal extra; funciona bien, y ni siquiera necesitamos tanto, aproximadamente el 50% de la concentración total es el estándar. Una vez que el ADN sale de la solución, el método normal es simplemente centrifugarlo hasta un gránulo en el fondo del tubo, reemplazar la sopa de isopropanol con la misma cantidad de etanol al 70%, enjuagar el gránulo (gire nuevamente si siente la necesidad), con cuidado vierta eso (observe el gránulo, puede ser resbaladizo), deje que se seque al aire durante unos 10 o 15 minutos y disuélvalo en el líquido que prefiera. El agua está bien, pero no protege contra las DNasas furtivas. Tris buffer + una pequeña cantidad de EDTA (también conocido como TE o LoTE para cantidades realmente pequeñas de EDTA) es preferible para el almacenamiento de muestras que tal vez desee utilizar más adelante.