¿Es posible que se produzca la separación del ADN?

La electroforesis en gel de agarosa es la forma más efectiva de separar fragmentos de ADN de diferentes tamaños que varían de 100 pb a 25 kb (1). La agarosa se aísla de los géneros de algas Gelidium y Gracilaria, y consiste en subunidades repetidas de agarobiosa (L- y D-galactosa) (2). Durante la gelificación, los polímeros de agarosa se asocian de manera no covalente y forman una red de haces cuyos tamaños de poro determinan las propiedades de tamizado molecular de un gel. El uso de electroforesis en gel de agarosa revolucionó la separación de ADN. Antes de la adopción de geles de agarosa, el ADN se separó principalmente mediante centrifugación en gradiente de densidad de sacarosa, que solo proporcionó una aproximación del tamaño. Para separar el ADN usando electroforesis en gel de agarosa, el ADN se carga en pozos prefabricados en el gel y se aplica una corriente. La columna vertebral de fosfato de la molécula de ADN (y ARN) está cargada negativamente, por lo tanto, cuando se coloca en un campo eléctrico, los fragmentos de ADN migrarán al ánodo cargado positivamente. Debido a que el ADN tiene una relación masa / carga uniforme, las moléculas de ADN están separadas por tamaño dentro de un gel de agarosa en un patrón tal que la distancia recorrida es inversamente proporcional al registro de su peso molecular (3). El modelo principal para el movimiento del ADN a través de un gel de agarosa es la “repetición sesgada”, mediante la cual el borde delantero se mueve hacia adelante y tira del resto de la molécula (4). La velocidad de migración de una molécula de ADN a través de un gel está determinada por lo siguiente: 1) tamaño de la molécula de ADN; 2) concentración de agarosa; 3) conformación de ADN (5); 4) voltaje aplicado, 5) presencia de bromuro de etidio, 6) tipo de agarosa y 7) tampón de electroforesis. Después de la separación, las moléculas de ADN se pueden visualizar bajo luz ultravioleta después de teñir con un tinte apropiado. Siguiendo este protocolo, los estudiantes deberían ser capaces de: Comprender el mecanismo por el cual los fragmentos de ADN se separan dentro de una matriz de gel. Comprender cómo la conformación de la molécula de ADN determinará su movilidad a través de una matriz de gel. Identificar una solución de agarosa de concentración apropiada para sus necesidades. un gel de agarosa para la electroforesis de muestras de ADN Configure el aparato de electroforesis en gel y la fuente de alimentación Seleccione un voltaje apropiado para la separación de fragmentos de ADN Comprenda el mecanismo por el cual el bromuro de etidio permite la visualización de bandas de ADN Determine el tamaño de los fragmentos de ADN separados.