¿Se puede secuenciar un patrón de metilación?

Si. Hay varios métodos que puede usar para hacer esto. Algunos le dicen qué regiones generales del genoma están metiladas en el tipo de célula de interés, pero si desea saber exactamente qué bases de ADN (“letras”) están metiladas, debe usar una técnica llamada secuenciación de bisulfito (llamada bisulfito en EE. UU. Inglés).

El primer paso es extraer el ADN del tipo de célula de interés y dividir la muestra en dos. Luego secuencia una porción “normalmente”, para determinar la secuencia de bases A, C, G y T.

Antes de secuenciar la otra porción, la trata con un químico llamado bisulfito de sodio. Este producto químico convierte cada base C no metilada en una base T. Sin embargo, las bases C metiladas están protegidas de esta conversión, por lo que permanecen como Cs. Luego secuencia el ADN y lo compara con la primera secuencia (no tratada con bisulfito) para ver qué Cs se convirtió en Ts.

Como ejemplo, si tiene un fragmento de ADN con la secuencia AACGTmCGT y lo trata con bisulfito, la C normal se convertirá en una T, pero la C metilada (mC) no. Entonces, cuando compara la secuencia de 1) el ADN original no tratado y 2) el ADN tratado con bisulfito, verá esto:

  1. AACGTCGT
  2. AATGTCGT

Entonces, esta comparación muestra dónde debe haber estado el m (grupo metilo).

Sí, hay métodos técnicos que pueden obtener información relevante. Estos métodos no son perfectos. Parte del problema es que la metilación en muchos casos no es 100% penetrante. Eso significa que en una población de moléculas de la misma secuencia primaria, algunas están metiladas y otras no.

La mayoría de las veces, cuando las personas usan la palabra “metilado” en la secuencia de ADN, significan 5-metilcitosina.

Si. El patrón de metilación resultante puede llamarse el “metiloma”, que es diferente en diferentes tejidos, etapas de desarrollo y estados de salud, incluso en un organismo dado.