¿Qué técnica podría usarse para silenciar un gen?

No estoy tan al día con los métodos utilizados para silenciar genes en estos días. He usado un método en el pasado que es bastante común y relativamente simple, pero no es una prueba completa. El método del que estoy hablando es la interferencia de ARN [1] o ARNi.

Este método es fácil porque no tiene que meterse directamente con los genes del organismo huésped. Hacerlo puede tener todo tipo de efectos secundarios no deseados. Todo lo que debe hacer es introducir un plásmido en el organismo huésped y Bob es su tío. Obviamente es un poco más complicado que eso, un poco.

El plásmido contendrá un gen con un fuerte promotor, porque debe haber una gran cantidad de ARNm presente para que este método funcione. Obviamente, también necesita una forma que garantice la persistencia del plásmido, ya sea un gen de resistencia a los antibióticos o un gen que codifique una enzima esencial para el uso de una determinada fuente de alimento.

La premisa central detrás de RNAi es que el ARN bicatenario se marca por degradación. El gen codificado en el plásmido codifica el complemento inverso de la molécula de ARNm del gen diana. Al inundar el organismo huésped con el ARN del complemento inverso del gen objetivo ARNm. No quedará más ARNm para dar como resultado el producto proteico del gen objetivo porque todo el ARNm para el gen objetivo formará una doble cadena con el complemento inverso introducido y se degradará.

El inconveniente de este método es que siempre hay alguna expresión de fondo del gen objetivo. Algunas moléculas de ARNm se deslizan a través de las grietas. Entonces, si es esencial que no haya absolutamente ningún producto genético, entonces este no es el método a utilizar

Ahora, eliminar un gen es otro esfuerzo más complicado. En el método preferido, reemplazaría el gen, partes de él o la región promotora con código sin sentido o un gen informador en un método llamado recombinación homóloga. Este método funciona como funciona normalmente la recombinación genética durante la meiosis.

El plásmido tendrá partes del gen diana copiadas, donde tiene lugar la recombinación. En el medio estará el código, digamos un gen reportero, que se inserta. Si la recombinación es exitosa, se expresará el gen informador, que puede ser cualquier cosa, desde un gen de resistencia a antibióticos hasta un gen GFP.

(Realmente tuve que cavar aquí, muy probablemente perdí algunos métodos interesantes, creo que estos son, con mucho, los más comunes)

Notas al pie

[1] interferencia de ARN

Existen varias técnicas que pueden usarse para silenciar un gen, para la línea celular las más utilizadas son:

• Interferencia de RNAi: esto permite regular a la baja la expresión de un gen, en realidad puede lograr una reducción de la expresión en un 40-60%
• Edición de genes: probablemente ya haya oído hablar de CRISPR / Cas9, esto permite introducir indeles (inserción / eliminación) en una ubicación específica del gen que le permite lograr un KO completo del gen. Esta técnica es fácil de usar, relativamente barata. La desventaja es que pueden ocurrir fuera de los objetivos (pero también en RNAi), aunque se han realizado grandes mejoras para que la relación fuera del objetivo sea bastante baja.