- Identificación con método espectroscópico.
Teniendo en cuenta que sus muestras de ARN y ADN son puras …
En un espectrómetro, tome la lectura de OD (densidad óptica) de las soluciones a longitudes de onda de 260 nm y 280 nm. Si su relación de lectura de OD (a 260/280) es o cerca de 1.8, entonces la solución es ADN, es 260/280 = 2.0, entonces la solución es ARN.
2. Identificación con observación del color.
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Teniendo en cuenta que sus muestras de ARN y ADN son puras …
Supongamos que tiene soluciones en los tubos de ensayo A y B.
Ahora divida las soluciones en A en dos tubos de ensayo A1 y A2; hacer lo mismo para B (B1, B2)
a) Ahora agregue DPA (difenilamina) + tampón de citrato de sodio salino en el tubo A1 y B1 y caliente los tubos en un baño de agua hirviendo durante 10-20 minutos y luego enfríe la mezcla de solución a temperatura ambiente. El tubo en el que la solución se vuelve AZUL , contiene una solución de ADN. [Sugerencia: el DPA reacciona con azúcares de ADN desoxirr ribosa en condiciones ácidas]
b) Hacer reactivo de Orcinol = Orcinol + cloruro férrico (FeCl3) + HCl concentrado
Ahora agregue reactivo de Orcinol + solución salina en otros dos tubos de ensayo: A2 y B2 y caliente los tubos de ensayo en baño de agua hirviendo durante 20 minutos y luego enfríe la mezcla de solución a temperatura ambiente. El tubo en el que la solución se vuelve VERDE , contiene solución de ARN. [Sugerencia: el orcinol en condiciones altamente ácidas reacciona con los azúcares de ARN de pentosa ribosa]
Entonces, ahora entiendes cómo puedes distinguir experimentalmente el ADN y el ARN mediante dos técnicas diferentes. Traté de responder lo más simple que pude. Para un protocolo detallado, solo busque en google:
Estimación de ADN por método DPA
y
Estimación de ARN por el método Orcinol (prueba de Bial)
