Descargo de responsabilidad: al no tener experiencia en el cultivo de cloroplastos, no puedo responder personalmente por mi respuesta, sin embargo, confío en que las personas que escribieron los protocolos que examiné sepan lo que están haciendo .;)
El más simple que pude encontrar fue de un artículo de Bazzaz y Rebeiz (1978), “El potencial de reparación de clorofila de los cloroplastos maduros incubados en un medio simple”. Utilizaron un medio simple de Tris-HCl / sacarosa suplementado con cofactores.
Y luego está este de Carey et al (1985), donde aislaron cloroplastos de plantas etioladas (plantas cultivadas en la oscuridad) e intentaron inducir la biosíntesis de protoclorofilamida de monovinilo y divinilo (algunas especies químicas producidas en cloroplastos). Para el medio de aislamiento, utilizaron sacarosa 0,5 M, HEPES 15 mM, TES de 30 mm, 1 mm.
MgCl2, Na2EDTA 1 mM, cisteína 5 mM, ALA 33 AM y 0.2%
BSA (p / p) a pH 7.7.
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Para la incubación, básicamente utilizaron un medio de suspensión ( sacarosa 0,5 M, Tris-HCl 0,2 M, MgCl2 20 mm, Na2EDTA 2,5 mM, ATP 20 mM, NAD 40 mM, metionina 8 mm, BSA al 0,1% (p / p), 5 fitol uM y metanol de 1,25 mm a un pH de 7,7 ) y se añadieron ALA (ácido aminolevulínico) de 10 mm.
Si lo piensas bien, los cloroplastos no son más que bacterias fotosintéticas endosimbióticas en las células vegetales. Entonces, quizás lo que usamos para cultivar bacterias fotosintéticas podría funcionar con cloroplastos. Agapakis et al (2011) usaron Synechococcus elongatus y trataron de inyectarlo en células eucariotas (para hacer “cloroplastos sintéticos”). Para cultivar S. elongatus , utilizaron el medio BG-11 de Stanier et al (1971).
Medio BG-11 – Compuesto Amt (g / litro)
NaNO3 (1.5)
K2HPO4 (0.04)
MgSO4 * 7 H2O (0.075)
CaCl2 * 2 H20 (0.036)
Ácido cítrico (0.006)
Citrato férrico de amonio (0.006)
EDTA (sal de disodio y magnesio) (0.001)
Na2CO3 (0.02)
Mezcla de trazas de metal A5b (1 ml / litro)
