CyTOF es una técnica de citometría basada en espectrometría de masas [1-4] CyTOF se basa en la detección de iones de metales de transición que normalmente no se encuentran en las células por su masa única. La identificación real del objetivo es conjugar los iones metálicos de transición con los anticuerpos que seleccionan las proteínas objetivo.
Ventajas de CyTOF
- Más marcadores Un espectrómetro CyTOF puede detectar hasta 34 marcadores (uno para cada metal de transición), mientras que un citómetro de flujo basado en fluorescencia de alta gama solo puede detectar alrededor de 15 debido a la superposición espectral. No se requiere compensación [5,6] en CyTOF.
- Señal de fondo más baja La falta de autofluorescencia se traduce en una mayor sensibilidad en algunos experimentos.
Desventajas de CyTOF
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- La clasificación no es posible. CyTOF es una técnica destructiva. No es posible clasificar las celdas, lo que descarta ciertos tipos de experimentos. = Por ejemplo, no es posible usar CyTOF en la evolución dirigida mediante visualización de levadura donde la clasificación se utiliza para desarrollar la afinidad de una proteína por otra proteína objetivo marcada con fluorescencia.
- Menor rendimiento. La citometría de flujo puede hacer aproximadamente 20-25 millones de células por hora, mientras que CyTOF solo puede hacer una fracción de eso (alrededor de 2 millones por hora)
- Menos anticuerpos disponibles. Cada anticuerpo para CyTOF necesita tener un sitio específico de unión a iones metálicos.
- Mayores costos iniciales y de capital [5]
Para la mayoría de los experimentos estándar, los experimentos de citometría de flujo basados en fluorescencia parecen tener la ventaja o son al menos suficientes. Para los experimentos que requieren esquemas de etiquetado complejos, el análisis de múltiples marcadores o CyTOF de alta sensibilidad tiene una ventaja.
Referencias
- Una tecnología de células individuales altamente multiplexada para avanzar en el desarrollo de fármacos
- http://iti.stanford.edu/content/…
- Presentación de CyTOF: citometría de las masas
- http://www.nature.com/nbt/journa…
- Compensación de fluorescencia en citometría de flujo
- Compensación
- Costos experimentales en CyTOF versus citometría de flujo
