Imagina que tengo una larga línea de contrabailarines masculinos y femeninos. En nuestra sociedad predominantemente heterosexual, cada bailarín está emparejado con otro bailarín del sexo opuesto.
En el ejemplo anterior, una línea como
MFFF
Va a tener otro grupo como
FMMM
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Es importante que haya una orientación de esta línea. En el caso de la línea, hay la izquierda de la persona y el derecho de la persona. Si orientamos estas líneas para que siempre vayamos de izquierda a derecha, deberíamos tener
MFFF
y
MMMF
Pongamos esto en términos de biología. Cada persona individual es una base y se combinan con el par apropiado. En nuestro ejemplo de baile, el Masculino (M) está emparejado con el Femenino (F) y viceversa. Del mismo modo, las bases de ADN se emparejan de A a T y de C a G.
El orden femenino masculino de una línea de personas de izquierda a derecha es una secuencia de personas. La línea opuesta de las personas es la inversa. complemento de nuestra secuencia.
Supongamos que estas dos líneas se separan. Nuestro líder de baile quiere emparejar bailarines individuales gratuitos con la línea de personas ya preestablecida. Comenzando desde el final, el líder agrega personas a la derecha de la persona anterior en un asunto donde se hace el par apropiado.
Sin embargo, considere el caso en el que hay un hombre enojado (M *) que no quiere que se agregue a nadie más a su derecha. Esto termina la línea que molesta a la Líder de baile y hace que se mueva a la siguiente línea no emparejada. Si el Líder de baile continúa haciendo esto, eventualmente obtendrás un montón de líneas que están completamente emparejadas, pero varias líneas con tu Hombre enojado que detuvo la línea.
Si vamos a emparejar la línea MFFF varias veces, obtendría una línea complementaria como
MMMF (la línea completa)
y
METRO*
MM *
MMM *
Si hiciéramos lo mismo pero todos los Hombres fueran geniales con tener vecinos pero tuviéramos una Mujer enojada (F *) obtendríamos
MMMF *
Poniendo términos biológicos en su lugar, nuestro Dance Leader es una polimerasa y nuestros M * y F * son didesoxinucleótidos que terminan la cadena. La polimerasa agrega bases no de izquierda a derecha, sino de 5 ‘a 3’ .
Si hiciera esto en dos lotes separados y luego separara las líneas por tamaño, obtendría muchos MMMF. Pero también obtendría
M *, MM *, MMM *
Con el grupo femenino obtendría MMMF *
Por el hecho de que he truncado líneas de tamaño 1,2,3 en el grupo M * y sé que solo una M * podría causar esa detención, puedo suponer que se suponía que tenía una M en las posiciones 1,2, 3) Puedo verificar esto sabiendo que en mi grupo F *, no había líneas de tamaño 1,2,3. Por lo tanto, puedo determinar que la secuencia de mi complemento inverso fue MMMF. Encontrar el complemento inverso a eso me daría MFFF.
Esto me obligó a hacer mi experimento con dos grupos separados, uno con M * y otro con F *. Puedo facilitar mi trabajo pidiéndoles a todos que usen el mismo color. Hagámoslo fácil a mis ojos y todos deben vestir de negro. Ahora, etiquetaré todos mis M * haciéndolos usar rojo y todos mis F * usarán azul. Por lo tanto, cuando separo mis líneas, solo puedo buscar líneas rojas de cierta longitud y líneas azules de cierta longitud.
La secuenciación de Sanger esencialmente hace eso. Puede marcar con fluorescencia los didesoxinucleótidos que terminan su cadena (ddNTP) y agregarlos a una mezcla de nucleótidos. A medida que su polimerasa extiende las cadenas de ADN, los ddNTP se incorporarán y terminarán la cadena. Estas cadenas truncadas se pueden separar por tamaño y al observar los colores individuales, puede determinar qué extensión de parada base le permite determinar la secuencia de ADN.
