Los sitios loxP se introdujeron tradicionalmente mediante la inyección de una construcción de ADN (plásmido o ADN lineal) que contenía brazos de homología que incluían su gen de interés flanqueado por sitios loxP. Por lo tanto, durante la reparación del ADN, estos brazos de homología se usarían en la vía de reparación dirigida por homología y los sitios loxP se integrarían en el genoma, flanqueando su gen de interés. Básicamente, está reemplazando el gen endógeno (o exón) con su versión floxa del mismo gen (o exón). Este diagrama muestra una descripción general de todo el proceso (sé que dice células ES, pero el mismo principio también se aplica a los ratones)
Hoy en día, CRISPR se puede utilizar para hacer esto con una eficiencia mucho mejor. Puede inyectar el CRISPR junto con su construcción de ADN en el embrión. El CRISPR realiza una ruptura de doble hebra que hace que las vías de reparación se activen. La presencia de su construcción activa la ruta dirigida a la homología y ocurre el mismo proceso que se explicó anteriormente y obtiene el alelo recombinado que contiene su gen (o exón) de interés con los sitios loxP.
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