Utilizamos un método muy simple y barato llamado ‘método Edwards’ para extraer ADN y hacer genotipos. El protocolo es el siguiente:
Protocolo de extracción de ADN (modificado de Edwards et al. (1991, NAR 19: 1349))
1. Coloque aproximadamente 20 mg de tejido vegetal en un tubo Eppendorf de 1,5 ml.
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2. Rompa el tejido con una mano de mortero de pellets (Kontes: Vineland, NJ).
3. Agregue un poco de arena estéril y 400 µl de tampón de extracción (Tris-HCl 200 mM, pH 7.5, NaCl 250 mM, EDTA 25 mM, SDS al 0.5%).
4. Muele el hielo con una mano de mortero hasta que esté completamente molido.
5. Centrifugar en una microcentrífuga de mesa a 4 ˚C durante 5 min.
6. Transfiera el sobrenadante al nuevo tubo Eppendorf (aproximadamente 350 µl).
7. Agregue 1 volumen de isopropanol helado e incube en hielo durante 5-30 min.
8. Centrifugar en microfuga a temperatura ambiente durante 5 min.
9. Deseche el sobrenadante y el sedimento seco.
10. Resuspender en ~ 50 µl de TE, almacenar a -20 ˚C.
Este es el extracto final de ADN. Debería ser bueno para las reacciones de PCR para el genotipado.
