¿Cómo podemos identificar el ADN objetivo de la mezcla de una muestra de ADN desconocida?

Por lo tanto, no tengo del todo claro lo que está preguntando, por lo que haré algunas suposiciones.

Supongamos que tiene una escena del crimen y desea separar las diferentes muestras de ADN que se encuentran allí. Actualmente, el método que usan los científicos forenses es algo llamado mapeo STR. STR son las siglas de Short Tandem Repeats. Resulta que en nuestro genoma, hay lugares donde tenemos estas repeticiones múltiples sin razón aparente. Un ejemplo de repetición en tándem podría tener este aspecto: CCACCACCACCA: el motivo “CCA” se repite 4 veces en este ejemplo. Curiosamente, el número de repeticiones en cualquier loci dado puede variar de persona a persona.

Ahora, mirar el número de repeticiones en un locus tiene un poder de discriminación limitado, ya que varias personas pueden tener el mismo número de repeticiones. Pero si observa el número de repeticiones en 13 loci diferentes, entonces el poder de identificación aumenta considerablemente. La probabilidad de que dos personas tengan exactamente el mismo número de repeticiones en 13 loci diferentes es increíblemente baja. Si aumenta el número de loci que interroga, el poder de discriminación aumenta aún más.

Entonces, ¿cómo se mide el número de repeticiones en un lugar determinado? Bueno, tomas la muestra de ADN y amplificas esas regiones del ADN usando cebadores de ADN (los cebadores son específicos para un locus dado y recogen las regiones de ADN que flanquean la repetición) en un proceso llamado amplificación por PCR (reacción en cadena de la polimerasa). El tamaño del producto de PCR luego se ejecuta en un gel de acrilamida para determinar el tamaño y dado que el tamaño del producto está relacionado con el número de repeticiones (cuanto más repeticiones significa que el producto es más grande), puede determinar el número de repeticiones en el locus comparándolo con un estándar.

Bien, entonces, tenemos una mezcla de ADN. Para un lugar determinado, podríamos obtener una mezcla de tamaños: 10 y 14 repeticiones (por simplicidad, supongamos que esto significa que tenemos dos muestras de ADN mezcladas). Es posible que no sepa qué número de repetición pertenece a quién, pero si tiene una “víctima”, puede amplificar el ADN de esa persona y determinar que tiene una repetición de 14 en el lugar en cuestión. Por lo tanto, la otra persona desconocida tiene una repetición de 10. Esta es información útil si tiene un grupo de sospechosos. Podrías pedirle a tus sospechosos una muestra de ADN (en programas policiales, a veces ves a la policía frotando la mejilla de alguien por una muestra de ADN) y luego determinar quién de ellos tiene 10 repeticiones en ese lugar. Una vez más, no solo mirarías un lugar, sino 13 o más lugares para obtener una buena combinación.

Típicamente, cuando la policía toma una muestra de ADN en la escena del crimen, amplifican las repeticiones en 13 loci y determinan el número de repeticiones en cada una. Esto luego se alimenta a una computadora que intenta hacer coincidirla con una base de datos nacional (CODIS). Si hay una coincidencia (porque esta persona fue arrestada por otro delito, por ejemplo), entonces sabe que esta persona estaba potencialmente en la escena del crimen. Si no hay coincidencia, al menos tiene una “huella digital de ADN” en el archivo para uso futuro. Es posible que no sepa quién es la persona (digamos que esta persona es buena para evitar el arresto), pero al menos puede decir que la persona X estuvo en cada uno de estos lugares y probablemente cometió todos estos crímenes.

El método más fácil y más utilizado es la electroforesis en gel. Este método separa las cadenas de ADN en función de su tamaño molecular, por lo que deberá conocer el tamaño molecular de su ADN objetivo. Usando el marcador de ADN como guía, podrá identificar su banda de ADN objetivo que aparece en el tamaño molecular que espera que aparezca.

Si conoce la secuencia de ADN, puede solicitar una sonda de ADN complementaria de varios laboratorios que lo harán por usted. Si usted es un estudiante graduado en un laboratorio de biología molecular de la universidad / universidad, puede haber un secuenciador en el laboratorio. Mira como eBay

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Si conoce la secuencia, puede diseñar cebadores y ejecutar una PCR simple.

Si. Si busca documentos de Y Fofanov en PubMed, verá ejemplos de cómo se hizo esto. Se utilizó para identificar la presencia de ADN patógeno en el ADN del huésped.