¿Por qué no se pudo crear una biblioteca MRNA?

Supongo que está haciendo esta pregunta en el contexto de los ensayos de transcripción, muchos de los cuales implican un paso de transcripción inversa para crear una biblioteca de ADNc basada en fragmentos de ARNm. La respuesta es doble:

1. El ARN es mucho menos estable que el ADN, como dice el refrán, “muéstrame un biólogo que disfrute trabajar con ARN y te mostraré un mentiroso”. Debido a su inestabilidad inherente, es muy molesto trabajar con el ARN. Cualquiera que alguna vez haya tenido que hacerlo te lo dirá. EDITAR : He trabajado mucho más con el ARN desde que escribí esta respuesta y he disfrutado inmensamente … Haz de eso lo que quieras.

2. Los métodos de secuenciación se diseñaron tradicionalmente * para el ADN: aislar y purificar el ARN es bueno y bueno, pero en muchos casos es necesario secuenciar ese ARN para obtener información útil. Dado que el ARN es mucho menos estable que el ADN, y el ADN se considera la molécula que constituye “el código genético”, toda la secuenciación genética se produce a nivel de ADN. Como tal, necesita una biblioteca de ADNc para secuenciar.

Esas son las dos razones por las que expondría por qué un ARNm no podría / no podría crearse.


* Keith Robison sugirió una edición de esta respuesta que hace falsa la segunda parte: “[esto es] ya no es cierto; La secuenciación directa de ARN se ha demostrado en las plataformas Helios / SeqLL, PacBio y Oxford Nanopore: Oxford está haciendo un esfuerzo serio en la comercialización de la tecnología ”. Definitivamente no me he encontrado con esto antes, ¡pero es genial! Gracias Keith!

Se pueden crear y son bastante regulares. Ver preparación de la biblioteca de ARNm

¿Está preguntando en qué condiciones una biblioteca de ARNm sería poco práctica?