Cómo mejorar las resoluciones máximas en cromatografía

No es fácil responder esto ya que cada caso es diferente. Su pregunta es bastante general, pero supongo que principalmente desea discutir la cromatografía líquida, ya que en el lado del GC básicamente puede jugar con el gradiente de temperatura y la columna en sí o la fase estacionaria, la fase móvil es siempre la misma. Como ya sabe, la separación en LC es el resultado de las interacciones químicas entre el soluto hacia la fase móvil y estacionaria. Básicamente las particiones de solutos entre la fase estacionaria y la fase móvil. A medida que el proceso se realiza en cada cuenta desde la fase estacionaria, el efecto se vuelve aditivo y esto permite una separación entre compuestos de diferente naturaleza.

En LC uno puede jugar con muchos parámetros diferentes, a saber:

La columna utilizada con su carga de carbono, forma y tamaño de partículas, porosidad,

Concentración orgánica de la fase móvil.

pH

fuerza iónica

velocidad y forma del gradiente

Temperatura

contador de ION en la fase móvil

velocidad de la bomba o, más bien, velocidad lineal de la fase móvil.

Si conoce la diferencia en la estructura entre los solutos que desea resolver, puede deducir las condiciones en las que puede someter la columna para obtener una mejor separación. Si no conoce la identidad de la especie, tendrá que confiar en su experiencia para realizar los cambios adecuados para mejorar la resolución.

Estoy de acuerdo con Richard Routhier. Cuando desee mejorar la resolución máxima en LC, puede tener una larga lista para probar, y el conocimiento de la diferencia en la estructura (y el carácter de los analitos, como sus valores de pKa) sería de gran ayuda. Quiero agregar algunos puntos aquí:

(1) En general, UHPLC tiene un poder de separación mucho mejor que la HPLC tradicional. Si tiene suficiente dinero, probablemente sea una buena idea actualizar su instrumento.

(2) ¿Alguna vez probó la derivatización antes de la separación por LC? Aunque la derivatización se usa mucho menos en LC que en GC, puede encontrar literatura sobre los analitos en los que está trabajando.

(3) ¿Cuál es el estado del instrumento? ¿Está bien mantenido? ¿Se ha minimizado el volumen muerto? ¿Obtuviste una buena forma de pico (afilada y simétrica)?

Espero que las sugerencias anteriores sean útiles para usted.