Los westerns pueden ser buenos, pero a menudo no lo son. A menos que y hasta que el anticuerpo que está utilizando esté bien caracterizado y validado, sus westerns realmente deben incluir una amplia gama de controles. Las personas a menudo incluyen controles positivos, pero es mucho más raro ver que los controles negativos (más importantes) se realicen correctamente. Necesita tener la misma entrada que los carriles de prueba, careciendo solo de la proteína de interés; por supuesto, eso a menudo es muy difícil de configurar (por ejemplo, si está buscando proteínas celulares normales). Incluso si observa células infectadas por virus frente a células no infectadas, no es una garantía de que la célula no infectada sea similar a la infectada: las proteínas de choque térmico pueden no estar reguladas, por ejemplo, y dado que tienden a ser inespecíficas ” pegajoso “pueden parecer una reacción genuina.
Usar suero, en lugar de monoclonales, para sondear el Western también es problemático y puede conducir fácilmente a resultados de mierda.
Hay muchas cosas que puede hacer para mejorar la calidad occidental. La mayoría de las personas usan demasiados anticuerpos, por ejemplo; necesita diluir los anticuerpos primarios y secundarios de manera muy descendente (las compañías recomiendan rutinariamente usar concentraciones de anticuerpos secundarios que son miles de veces demasiado altas). Hay formas de agotar las reacciones de reacción cruzada, si realmente tiene que usar una sonda de baja calidad. Y así. Pero la mayoría de las personas no se toman la molestia de asegurarse de tener una buena técnica de limpieza antes de sumergirse.
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Nuevamente, un buen, bien controlado y validado Western está bien. Pero necesitan ser observados muy de cerca.
