La solubilidad de un péptido está determinada principalmente por su polaridad. Los péptidos ácidos se pueden reconstituir en tampones básicos y péptidos básicos en ácidos. Los péptidos hidrofóbicos y los péptidos neutros que contienen un gran número de aminoácidos hidrofóbicos o polares sin carga deben disolverse en pequeñas cantidades de solvente orgánico como DMSO, DMF, ácido acético, acetonitrilo, metanol, propanol o isopropanol y luego diluirse con agua. DMSO no debe usarse con péptidos que contengan metionina o cisteína libre porque puede oxidar la cadena lateral.
Pruebe una porción del péptido sintetizado antes de disolver el resto de la muestra. Es posible que deba probar varios solventes diferentes hasta que encuentre uno apropiado. La sonicación mejora la solubilización.
- Asigne un valor de -1 a cada residuo ácido. Los residuos ácidos son Asp (D), Glu (E) y el C-terminal -COOH. Asigne un valor de +1 a cada residuo básico. Los residuos básicos son Arg (R), Lys (K), His (H) y el N-terminal -NH2. Luego calcule la carga general del péptido.
- Si la carga general del péptido es positiva, el péptido es básico. Intente disolver el péptido en agua destilada si es posible. Si no se disuelve en agua, intente disolver el péptido en una pequeña cantidad de ácido acético al 10-25%. Si esto falla, agregue TFA (10-50 µl) para solubilizar el péptido y diluirlo a la concentración deseada.
- Si la carga general del péptido es negativa, el péptido es ácido. Los péptidos ácidos pueden ser solubles en PBS (pH 7,4). Si esto falla, agregue una pequeña cantidad de solvente básico como bicarbonato de amonio 0.1M para disolver el péptido y agregue agua a la concentración deseada. Los péptidos que contienen cisteínas libres deben disolverse en tampones ácidos desgasificados. Los restos tiol se oxidarán rápidamente a disulfuros a pH> 7.
- Si la carga general del péptido es cero, el péptido es neutro. Los péptidos neutros generalmente se disuelven en solventes orgánicos. Primero, intente agregar una pequeña cantidad de acetonitrilo, metanol o isopropanol. Para péptidos muy hidrófobos, intente disolver el péptido en una pequeña cantidad de DMSO y luego diluya la solución con agua a la concentración deseada. Para los péptidos que contienen Cys, use DMF en lugar de DMSO. Para los péptidos que tienden a agregarse, agregue 6 M de guanidina.HCl o 8 M de urea, y luego proceda con las diluciones necesarias.
Para prevenir o minimizar la degradación del péptido, almacene el péptido en forma liofilizada a -20 ° C o preferiblemente a -80 ° C. Si el péptido está en una solución, se deben evitar los ciclos de congelación-descongelación congelando alícuotas individuales.
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Residuos con carga positiva: K, R, H, N-terminal
Residuos con carga negativa: D, E, C-terminal
Residuos hidrofóbicos sin carga: F, I, L, M, V, W, Y
Residuos no cargados: G, A, S, T, C, N, Q, P, acetil, amida
Ejemplos:
RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 Esto se considera un péptido básico. Vea el paso 2 arriba.
EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 Esto se considera un péptido ácido. Vea el paso 3 arriba.
AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 Esto se considera un péptido neutro. Vea el paso 4 arriba.
