¿Cuáles son algunos consejos para obtener imágenes confocales extremadamente claras?

Asegúrese de estar usando la lente más adecuada, preferiblemente (si hablamos confocal, no MP), una lente NA tan alta como sea posible. Asegúrese de que la muestra se lave bien después de la tinción (si está manchada), así como de que se use el bloqueo adecuado durante la tinción. Asegúrese de utilizar un medio de montaje de buena calidad, baja autofluorescencia y posiblemente enfriamiento.

En lo que respecta a la configuración confocal, como de costumbre, deben tenerse en cuenta las restricciones de brillo, el rendimiento de fotones y el fotoblanqueo. Como regla general, escaneos más lentos, mayor iluminación y también promedios mejoran la claridad de la imagen … obviamente, una buena práctica dictaría que la potencia del láser sea lo más baja posible para obtener una imagen adecuada, lo que minimiza el fotoblanqueamiento … y si es posible, en la mayoría de los sistemas modernos , un promedio de 2 o 4 veces estaría bien para su publicación.

Si está utilizando un sistema de escaneo resonante, generalmente se utilizan más promedios y potencias láser más altas (debido a los menores tiempos de permanencia y fototoxicidad).

Asegúrese de que su muestra sea plana (si está trabajando con tejido), optimice el equilibrio de [potencia del láser, tiempo de adquisición, ganancia del detector] antes de recopilar sus datos … Y por el amor de Dios, asegúrese de tener todos sus controles !