¿Cuáles son las similitudes y diferencias entre la electroforesis en gel y la cromatografía líquida?

Bueno, para comenzar ambos, en un sentido amplio, representan un método cromatográfico. Por supuesto, desde las raíces latinas “chroma” + “graphos” = visualización del color, uno pensaría que los métodos cromatográficos están estrictamente limitados a aquellas técnicas que logran la separación basada en la separación de colores de una solución; Pero la realidad es muy diferente. Realmente, se entiende que la cromatografía incluye todas aquellas técnicas experimentales que usan reactivos / condiciones / sistemas elegidos intencionalmente en la búsqueda de separar las partes constituyentes de algo divisible ( es decir , una mezcla, entre otras cosas). Las diferentes manifestaciones de la cromatografía incluyen la cromatografía de alto rendimiento L Iquid C (HPLC), la cromatografía de permeación en gel (también conocida como cromatografía de exclusión por tamaño), la cromatografía en color (que en realidad es solo un pequeño experimento hecho a veces con estudiantes de secundaria / preparatoria para ilustrar el punto general), la cromatografía en columna, la cromatografía en capa fina (TLC), etc. Y, por supuesto, la electroforesis en gel también es un método cromatográfico.

La electroforesis en gel a menudo se usa en entornos biológicos donde es útil para obtener algún tipo de ensayo. La configuración experimental se presenta como un recipiente rectangular largo (abierto en la parte superior) en el que se conectan un electrodo positivo y negativo, uno a cada extremo del recipiente. Dentro de la cuenca en sí hay un gel que se extiende por toda la cuenca; un material comúnmente utilizado se conoce como gel de agarosa. El gel tiene una serie de pequeños pozos o hendiduras cortadas en su “carne” en un extremo y aquí es donde se insertan los restos biológicos / químicos relevantes, generalmente usando una micropipeta. Aquí hay un ejemplo de cómo se vería una configuración típica de electroforesis en gel.

Es importante ejercer la destreza aquí solo porque uno puede perforar rápidamente el gel y, al hacerlo, volverlo inútil para la vida útil del sustrato de gel. La electroforesis en gel es una técnica muy importante en muchos laboratorios forenses. Esta es la técnica utilizada para dar resultados de prueba positivos o negativos, ya que podrían buscarse en, por ejemplo, pruebas paternas o pruebas entre un conjunto de sospechosos en un caso de violación. La variable de control es, en el primer caso, el niño mismo. Un analista forense primero realizaría el trabajo necesario que implica obtener una piel / cabello / etc. muestra y aislamiento del ADN. Esta muestra de ADN se inserta en uno de los pocillos del gel electroforético. El ADN del padre se obtendrá e inyectará de manera similar en un segundo pozo. Finalmente, una corriente es conducida a través del depósito y la muestra de ADN responde a la fuerza electromotriz inducida, fluyendo lentamente a lo largo del depósito y separándose gradualmente en un conjunto característico de líneas y grosores. Esta es una huella digital de ADN (ver más abajo) y es única para aquellos que comparten material genético idéntico.

En cuanto a las similitudes, ambas operan según este principio de separar un todo en sus partes, ya que las partes constituyentes son las que realmente codifican información útil para los científicos. Donde difieren es claro: cada uno explota este principio a través de un mecanismo diferente. La cromatografía líquida es más una variante de la cromatografía en columna. Tiene la muestra líquida que desea separar ( es decir , su analito), una columna llena de un adsorbente (comúnmente sílice o alúmina) con la sofisticación adicional de una serie de mangueras y bombas. Las partes se separan en la noción de que las diferentes partes de su analito exhibirán diferentes tasas de elución en función de su interacción característica con la fase estacionaria ( es decir , la sílice / alúmina); esta “reacción característica” se basa casi por completo en la atracción intermolecular de la polaridad (o, en ausencia de interacciones que retrasen el progreso del analito a través de la columna, simplemente no polaridad). Al igual que en la cromatografía en columna, hay un líquido que funciona como su fase móvil ( es decir , su eluyente) y que impulsa al analito a través de la columna.