¿Cómo extraen los científicos forenses el ADN simplemente usando una cantidad muy pequeña de muestras en el campo?

No necesita una gran cantidad de ADN en primer lugar para ejecutar la huella digital de ADN de un individuo. Mientras investigábamos en la Universidad de Michigan-Dearborn, extrajimos rutinariamente ~ 2-3 ng / uL de ADN (que es de muy bajo rendimiento ) de las patas o fragmentos de alas de mariposas y polillas, y una PCR simple con un cebador adecuadamente seleccionado el par dio hermosos resultados en gel.

Para las huellas digitales de ADN, los científicos forenses utilizan un conjunto estandarizado de pares de cebadores para los 13 loci de microsatélites en CODIS, junto con el locus AMEL (también en CODIS):

No me sorprendería en absoluto si los pares de cebadores para los loci CODIS ya están diseñados para PCR multiplex y ya tienen fluoróforos unidos. De esa manera, pueden ejecutar quizás 4 reacciones de PCR por réplica, con al menos 3 réplicas, y algunos controles además de eso. Una vez hecho esto, simplemente inserte el producto de PCR en una máquina de electroforesis capilar, y ha tomado una huella digital de la muestra con varias réplicas, todo dentro de aproximadamente 4 horas (sin contar la extracción de ADN).

Sus métodos no están equivocados, pero en última instancia depende de la sensibilidad para la que se diseñó su análisis. Uno puede ir con incluso menos ADN de lo que Patrick menciona. He diseñado ensayos que podrían detectar una copia de ADN de mi objetivo de interés dentro de 1 copia de un genoma (1 picagrama (depende del tamaño del genoma, pero para mi propósito este era el tamaño) del ADN). Hay una ciencia detrás de cómo diseñar ensayos de PCR que pueden usar muy poco ADN para obtener la información necesaria.

Además, incluso hay protocolos de secuenciación de próxima generación que pueden usar la cantidad de picagramos de ADN para realizar el análisis. Optimice la química y puede ser muy sensible. Además, la intensidad de las bandas de un gel después de la electroforesis es muy relativa, ya que está directamente relacionada con la cantidad de exposición a los rayos UV que le da. Si tiene una muestra que tiene poco ADN para la entrada y otra que es mucho mayor (como los controles frente a la muestra), obviamente esperaría que las bandas de PCR se correlacionen con la entrada.