En la electroforesis en gel, ¿por qué las hebras pequeñas de ADN se mueven más rápido que las hebras grandes?

Puedo hacerlo mejor que una caricatura de ADN moviéndose a través de un gel: ¡un video!

Carlos Bustamante no explica ninguna física en este video, así que déjame agregar detalles. Es bastante complicado modelar en detalle, y de hecho, los modelos que tenemos funcionan bien solo para casos muy específicos, pero podemos dar una descripción cualitativa aquí. (Antes de comenzar, noto que el ADN de T4 en este video tiene una longitud de 170 kbp, mucho más de lo que nunca usarías en un gel a menos que estuvieras loco, porque tomaría una eternidad. Pero los comportamientos particulares son probablemente universales).

El ADN que se mueve a través de un gel es un polímero de cadena de unión libre que se mueve a través de un material poroso. El material poroso realmente debe considerarse como un espacio con obstáculos con un cierto espacio promedio. La elección del espacio determina la capacidad del gel para resolverse entre diferentes tamaños de ADN.

Ahora, ¿qué quiero decir con cadena de articulación libre? Lo más importante, sus propiedades (en un gel, pero no necesariamente en las células) son impulsadas entropicamente. La longitud de persistencia del ADN (la longitud de decaimiento exponencial sobre la cual cae la autocorrelación de dos vectores tangentes a lo largo del contorno del ADN) es de aproximadamente 50 nm, o aproximadamente 150 pares de bases. Entonces, para un ADN mucho más largo que 150 pb, en realidad se modela bien como una cadena de segmentos rígidos conectados por articulaciones totalmente flexibles. En otras palabras, una caminata aleatoria de segmentos rígidos. El modelo FJC más simple se ajusta bien si supone una longitud de segmento K (“longitud de Kuhn”) de 100 nm, por lo que una molécula de ADN de longitud L nanómetros tiene una distancia media de extremo a extremo x de [matemáticas] x = \ sqrt {L / K} * K [/ matemáticas]

Si su distancia de extremo a extremo x es pequeña, entonces el ADN simplemente pasa por los obstáculos y se mueve más o menos balísticamente a través del gel. Si es grande, el ADN golpea los obstáculos y se estira a su alrededor, como se ve en el video. La fuerza neta sobre la molécula (el componente a lo largo de los campos E) se reduce y, por lo tanto, la velocidad promedio es menor.

Las moléculas de ADN súper largas pueden enredarse extremadamente, hasta el punto de que simplemente no se mueven a través de un gel. En tales casos, puede aplicar campos pulsados ​​que estiran y relajan alternativamente el ADN, o campos ortogonales para ayudarlo a encontrar otros caminos.

En el régimen de ADN corto, este modelo no se aplica claramente, pero aún parece aproximadamente correcto, probablemente porque el ADN no es una cadena de segmentos rígidos, sino más bien una barra larga con rigidez de flexión finita.

Tenga en cuenta también que debido a que el ADN / ARN monocatenario es mucho más flexible que el ADN bicatenario (longitudes de persistencia de unos pocos nm) puede separar moléculas muy pequeñas utilizando geles muy densos.

Ignorando las matemáticas y la física. Imagina un bosque denso, con árboles muy separados. Ahora haga que varias especies intenten pasar lo más rápido posible: conejos, ovejas, vacas, elefantes. Los animales más pequeños podrán deslizarse entre los árboles sin disminuir la velocidad. A medida que los animales crecen, tienen que pasar más tiempo buscando un espacio por el que puedan abrirse paso, por lo que se separarán según el tamaño.

De hecho, sé de alguien que escribió un código en C, que analiza la aproximación de la electroforesis en gel a través de una caminata aleatoria. Hubo un problema en el que el código daba resultados de que las hebras más grandes se movían más rápido que las más pequeñas, y luego el trabajo consistía en ajustar la velocidad a la que las hebras se movían a través del “gel” en función de su masa / número de unidades mer.

Creo que puedo tratar de resolverlo en alguna parte …