Bas ha mencionado que el método más directo y aplicable a la mayoría de las bacterias es medir la densidad óptica (OD600). Usando un espectrofotómetro, establezca el “blanco” con una cubeta que contenga medio no inoculado y luego mida la densidad óptica de su cultivo (esto corrige la absorbancia del medio a 600 nm). Asegúrese de permanecer dentro del rango lineal de su espectrofotómetro (consulte el manual, como debe decirse): realice las diluciones según sea necesario.
Para determinar la tasa de crecimiento, querrá tomar muestras en varios puntos de tiempo: cada hora funciona bien para E. coli y otros microbios de crecimiento rápido, pero para los insectos de crecimiento más lento puede ser mejor tomar más tiempo; tendrá que probarlo y ver). Luego trazará OD600 frente al tiempo.
Puede determinar la correlación de OD600 con los recuentos de células viables al colocar diluciones en serie de su muestra después de determinar la DO. Es mejor hacer esto temprano en la fase de crecimiento, mientras que la mayoría de las células son viables (más adelante, en lo que se llama “fase estacionaria”, algunas de las células pueden estar muertas o muriendo).
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Tenga en cuenta que para algunas bacterias, por ejemplo, aquellas que crecen de forma filamentosa o en grupos, OD600 generalmente no es muy confiable, y una medida alternativa es tomar muestras, sedimentar las células, permitir que se evapore el sobrenadante (líquido) restante y medir el peso de las células secas. .
