¿Cuáles son las desventajas de una caída de RNAi?

Es vulnerable a los errores de tipo II, es decir, puede tener falsos negativos. La técnica se llama lindamente “knockdown”, no “knockout” porque no necesariamente está eliminando toda la traducción de ARN. Entonces, ¿qué significa eso si no ves un efecto? Si no ve el efecto que está buscando, no sabe si esto se debe a que su derribo no funcionó, o no funcionó lo suficiente, o porque el efecto no está allí.

Esto también está relacionado con el hecho de que es difícil tener buenos controles con ARNi, especialmente los controles positivos. La expresión de su ARNi puede variar, puede haber efectos inespecíficos que son difíciles de controlar, etc. Al menos cuando estuve en el juego hace unos años, esta técnica tenía la reputación de ser difícil de acertar.

Dicho esto, si puedes hacer que funcione, puede ser bastante elegante. Simplemente no descuides tus controles.

Necesito saber más de lo que quieres decir.

Si quiere decir: ¿Cuál es la desventaja de una eliminación de ARNi frente a alguna otra técnica de modulación génica? Entonces, estaría de acuerdo con el primer párrafo de Ryan y parte de la respuesta de Brock. El ARNi puede disminuir la expresión del gen> 90%, pero aún no es un “golpe de gracia”. Solo la trampa de genes o CRISPR o la edición de genes pueden producir una “eliminación”. En términos de técnicas biológicas, la inhibición de moléculas pequeñas de una proteína de interés es posiblemente más simple (y no requiere reactivos de transfección para la mayoría de los ensayos in vitro) frente a RNAi. Sin embargo, por supuesto, las moléculas pequeñas no tienen la especificidad de RNAi. Además, dependiendo del mecanismo de acción exacto de cualquier proteína que le interese, la reducción de la expresión puede no producir el mismo fenotipo que la mera inhibición de la acción, por lo que depende de cuál sea la cuestión científica.

Si quiere decir: ¿Cuáles son algunas cosas que pueden salir mal con una caída de RNAi? Un inconveniente es algo llamado “desvío de objetivos”, donde un ARNip diseñado para silenciar un gen de interés involuntariamente puede silenciar un gen no deseado. Esto generalmente se debe a la complementariedad parcial, aunque considerable, entre la cadena de guía de siRNA y el gen de interés no deseado. La desviación puede ser mitigada a través del cuidadoso diseño bioinformático de un siRNA, pero probablemente nunca se pueda eliminar por completo. Endógenamente, una forma de ARNi es la vía de microARN (miARN). Se ha sugerido que algunas enfermedades pueden ser causadas o exacerbadas por una función inadecuada de miRNA. Para su pregunta particular, es posible que la desregulación de miRNA (s) pueda causar silenciamiento no intencionado de genes que conducen o exacerban la enfermedad.

No es un golpe de gracia total, baja reproducibilidad, efectos no heredables y fuera del objetivo