La relación de ARN ribosómico 28S / 18S se usa con frecuencia para evaluar la calidad del ARN total purificado de cualquier muestra dada.
Así es como funciona. Los ARNr 28S y 18S se producen mediante la escisión de un único transcrito de ARN como se muestra a continuación:
Fuente de la imagen: Dicotomía funcional de proteínas ribosómicas durante la síntesis de subunidades ribosómicas 40S de mamíferos.
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Dado que se producen a partir de una sola transcripción, la proporción del número de moléculas de ARNr 28S con respecto a la de las moléculas 18S presentes en una célula es igual a 1.
Sin embargo, si desea detectar estos ARNr en un gel de agarosa, la intensidad de las bandas producidas por estas moléculas depende del número de nucleótidos presentes en cada molécula. En humanos, el ARNr 28S tiene ~ 5070 nucleótidos, y 18S tiene 1869 nucleótidos, lo que da una relación 28S / 18S de ~ 2.7 . Una alta relación 28S / 18S es una indicación de que el ARN purificado está intacto y no se ha degradado. Por lo general, se considera que una proporción de 28S / 18S de > 2 significa que el ARN total purificado es de alta calidad.
ARN intacto vs degradado. Se corrieron dos µg de ARN total degradado y ARN total intacto junto al ARN Millennium Markers ™ de Ambion en un gel de agarosa desnaturalizante al 1,5%. Las bandas de ARN ribosómico 18S y 28S son claramente visibles en la muestra de ARN intacta. El ARN degradado aparece como un frotis de menor peso molecular.
Fuente de la imagen: Métodos para verificar la integridad del ARN | Tecnologías de la vida
