De la parte superior de mi cabeza, algunas maneras:
- Corte un poco de ADN genómico con sonicación o enzimas. Repare con un cóctel de enzimas. Ligarlo a una columna vertebral de plásmido o columna vertebral de fago de elección. Transforme esta mezcla de ligadura en bacterias que replicarán el esqueleto del plásmido / fago junto con el ADN genómico cortado que está dentro de él. Este ADN genómico replicado será su biblioteca.
- Amplifique su ADN con phiX polimerasa (o una polimerasa similar) que replica el ADN de manera imparcial. Corte esto a un rango de tamaño particular y secuenciar este ADN directamente en una máquina PacBio o Oxford Nanopore. Alternativamente, puede comenzar con un montón de ADN y evitar amplificarlo.
- Controle su ADN de interés con piezas de ADN llamadas transposones. Esto insertará transposones cada pocos cientos de bases. Amplifique el ADN usando cebadores específicos para los transposones. Esto le dará una biblioteca etiquetada de pequeñas piezas de ADN junto con códigos de barras de transposones para clasificar mejor el ADN después de la secuenciación en una máquina HiSeq o MiSeq.
