Respuesta corta:
RNApol II puede marcarse con un fluoróforo, incluido GFP, y retener su actividad. Sugaya, Vigneron y Cook [1] marcaron una subunidad RNApol II con GFP y encontraron actividad transcripcional en células de mamíferos a pesar de la etiqueta voluminosa. Entonces, sí, se puede hacer.
Cosas a considerar para los experimentos:
- ¿Por qué las dos subunidades ribosómicas no pueden unirse en ausencia de Mg ^ 2 +?
- ¿Cómo entra el ADN bacteriano en la célula? ¿Y por qué no se destruye antes de eso?
- ¿Cómo evitan los plásmidos lineales el límite de Hayflick?
- ¿Dónde se encuentra el codón?
- ¿Qué es la autenticación molecular?
Al incorporar la etiqueta, asegúrese de que la etiqueta y sus dominios no interfieran con los dominios RNApol II, especialmente los dominios involucrados en el ensamblaje de subunidades y la catálisis. Y si desea observación in vivo , le recomendaría un fluoróforo que tenga una longitud de onda de excitación más baja; no desea que la luz de longitud de onda corta pueda causar mutaciones.
¡Buena suerte!
Referencias
[1] Sugaya, K., Vigneron, M. y Cook, PR (2000). Líneas celulares de mamíferos que expresan ARN polimerasa II funcional marcadas con la proteína verde fluorescente. Journal of Cell Science, 2679-2683. Consultado el 17 de diciembre de 2016.
