¿Qué detectores se utilizan en la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)?

11 tipos de detectores hplc son revisados ​​en el artículo por K. Ramni, et. al, International Research Journal of Pharmacy 2 (5) 2011 p1–7.

Los 11 tipos:

  1. Detectores de índice de refracción
  2. Detectores ultravioleta
  3. Detectores fluorescentes
  4. Detectores de transporte
  5. Detectores electroquímicos
  6. Detectores de conductividad eléctrica
  7. Detectores de dispersión de luz líquida
  8. “Detectores avanzados”
  9. Detectores basados ​​en aerosoles
  10. Detectores quirales
  11. Detectores Amperométricos Pulsados

Si tomamos cada uno por turno:

  1. Detectores de índice de refracción: la detección depende de que el soluto modifique el IR general de la fase móvil. Este detector puede ser muy útil para la detección de compuestos no iónicos que no absorben en la región uv ni fluorescen. Los tipos de detectores IR incluyen el efecto Christiansen; Interferómetro y detectores de lentes térmicos.
  2. Detectores UV: estos son los detectores más utilizados en hplc. La mayoría de los compuestos orgánicos se absorben en la región ultravioleta o visible del espectro. Todos se basan en la ley de Beer-Lambert. Las subcategorías de detectores UV incluyen longitud de onda única; & Dispersivo de longitud de onda múltiple. Los últimos son de dos tipos: detector de dispersión y detector de matriz de diodos (DAD). Detector de dispersión utilizado para la separación de algunos ácidos carboxílicos y series de ácidos grasos. DAD utilizado para la identificación de venenos en medicinas tradicionales.
  3. Detectores de fluorescencia: estos son los detectores hplc modernos más sensibles, específicos y selectivos. Se puede detectar una sola molécula en la celda de flujo. Sensibilidad 10-1000 veces mayor que los detectores uv para materiales absorbentes de uv fuertes. 3 tipos: longitud de onda única: tiene una sensibilidad de ~ 1 X 10 exp-9 g / ml. Detector FL multivariable. Detector FL inducido por láser: la técnica óptica más sensible. LIFD generalmente se usa con electroforesis capilar.
  4. Detectores de transporte: cables móviles, cadenas y tipos de discos. La técnica extrae el soluto de la fase móvil y lo coloca en la superficie metálica del detector de transporte.
  5. Detectores electroquímicos: estos detectores responden a sustancias que pueden oxidarse o reducirse. Se produce una reacción en la superficie del electrodo. Los electrones generados conducen a la producción de una señal eléctrica. Dos tipos: detectores dinámicos y detectores de equilibrio. Dinámico o Amperométrico involucrado en detectores de matriz de múltiples electrodos que permiten la detección de varios analitos a la vez operando cada electrodo en matriz a un potencial diferente. Sustancias neuroactivas detectadas y separadas usando este detector. El detector de equilibrio mide la conductancia de la corriente que fluye; que cambia con soluto y registrado por este detector.
  6. Detector de conductividad eléctrica: utilizado para la determinación de cationes alcalinos y alcalinotérreos.
  7. Detectores de dispersión de luz líquida: estos detectores se basan en la medición de luz dispersa. 2 tipos Dispersión de luz láser de bajo ángulo y dispersión de luz láser multiangular. LALLS utilizados para la medición simple y precisa del peso molecular de moléculas grandes. En MALLS, la intensidad de la luz dispersa depende del tamaño, la forma, el material, la orientación y la estructura interna de la partícula.
  8. Detectores avanzados: LC-MS tiene una sensibilidad muy alta. Se utiliza para identificar productos químicos de masas particulares en presencia de otros productos químicos. es decir, mezclas complejas. Usado típicamente en bioanálisis y en desarrollo de fármacos. P.ej. Estudios farmacocinéticos, mapeo de péptidos, mapeo de glucoproteínas, desduplicación de productos naturales.
  9. Detectores basados ​​en aerosoles: hay 3 tipos: Detector de dispersión de luz por evaporación, ELSD. Detector de aerosol cargado, CAD. Detector de Aerosol de Nano Cantidad, NQAD. ELSD se utiliza para analizar compuestos como cafeína, carbohidratos, lípidos, tensioactivos, mezclas de polímeros y copolímeros. El CAD es aplicable para prácticamente cualquier compuesto no volátil o semivolátil, incluidos productos farmacéuticos, lípidos, proteínas, esteroides, tensioactivos, carbohidratos, polímeros, oligosacáridos y en la industria química y alimentaria. CAD analiza los medicamentos como el ibuprofeno, el estradiol y muchos otros medicamentos conocidos. NQAD es ideal para buscar impurezas de drogas, productos de degradación y expedientes. NQAD es aplicable en el análisis de compuestos no volátiles y semivolátiles como aminoácidos, carbohidratos, cationes y esteroides.
  10. Detectores quirales: para la detección de compuestos ópticamente activos que contienen un átomo de carbono asimétrico. La dispersión óptica rotativa y el dicroísmo circular son las dos técnicas de detección. Los detectores de ORD se usan para examinar compuestos como aminoácidos, analgésicos, diuréticos, vitaminas y sabores como alcanfor, aceite de naranja y aceite de limón. Los detectores de CD diferencian los enantiómeros. Los detectores de CD proporcionan detección sensible y selectiva de compuestos quirales que tienen absorción UV en el rango de 220-420 nm. Las señales UV + CD permiten la determinación de la pureza óptica sin separación quiral. Los compuestos como la flavanona, el azúcar, los óxidos de trans-estilbeno y el pindolol se pueden medir utilizando dicroísmo circular.
  11. Detectores amperométricos pulsados: PAD es un método importante para la separación y detección de compuestos alifáticos polares que tienen propiedades de detección pobres y requieren derivación para mediciones ópticas. PAD permite la detección directa de compuestos que contienen restos de amina, alcohol o azufre y carbohidratos.

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Hay muchos tipos de detectores, los más populares son los detectores UV, hay subdivisiones de ellos, podemos usar un detector de longitud de onda fija donde una lámpara generalmente de mercurio está brillando a una longitud de onda fija, eran populares hace 20 años desde que eran baratos, pero tienen ha sido reemplazado por un detector de longitud de onda variable donde una lámpara de deuterio emite un continuo de longitud de onda y un monocromador seleccionará la longitud de onda solicitada. Luego podemos ajustar la longitud de onda más apropiada para cada compuesto. El último tipo de detectores UV es la matriz de diodos donde todas las longitudes de onda se iluminan primero a través de la muestra y luego el haz se difracta en una matriz de diodos donde la energía se lee muy rápidamente hasta 100 veces por segundo. Luego puede obtener los espectros UV de las diversas sustancias y también compararlas con una biblioteca de espectro para comparar.

También tenemos detectores de índice de refracción donde el índice de refracción del líquido circulante se compara con un líquido de referencia. Se utiliza principalmente para la detección de azúcar u otros tipos de sustancias que no poseen una absorbancia UV.

También detector de fluorescencia para compuestos que fluorescen o emiten una longitud de onda más larga que la absorbida. Si la muestra es fluorescente, la sensibilidad suele ser de 100 a 1,000 veces más que un detector UV.

También podemos tener detectores de conductividad principalmente para la detección de iones. También detector electroquímico que mide la corriente producida por la celda energizada a un voltaje particular. La corriente es la cantidad de reducción u oxidación producida en la solución circulante.

Algunos detectores más recientes implican primero la nebulización de la fase móvil, detectores de dispersión de luz y espectrómetros de masas. El espectrómetro de masas es un detector muy costoso pero tiene el potencial de identificar rápidamente miles de compuestos.

Joe Hall

Los detectores ayudan a registrar los componentes separados del compuesto. Se utilizan diferentes tipos de detectores en HPLC como detectores UV, detectores RI, detectores fluorescentes. Estos detectores se seleccionan en función de la propiedad del compuesto a analizar.

Joe Hall

Los detectores son UV o, como es común en farmacología, un espectrómetro de masas de algún tipo, generalmente cuadrupolo. Con un detector UV, el analito se detecta y controla a través del nivel de luz UV que refleja después de ser separado en la columna cromatográfica. Cuando la HPLC se acopla a una MS, la detección se realiza diferenciando el analito separado, por sus respectivas relaciones de masa a carga (m / z). Luego, utilizando un detector computacional para medir los niveles de analito a medida que pasan a través del sistema.

Richard Routhier

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