Depende de si estamos hablando de secuenciación Pyro, o secuenciación Di-deoxy Oligo … En la secuenciación DDO, los oligo’s aleatorios individuales (ATCG) que son incapaces de extender un enlace fosfodiéster requerido para alargar una cadena de ADN, por lo tanto, después de la PCR amplificando millones de copias de su objetivo para la secuenciación, en la que se producirá una ruptura o fragmento en cada punto en el que se inserte un Di-desoxioligo A, T, C o G, en algún momento habrá literalmente al menos unos pocos copias de todas las longitudes posibles, de 1 base a 1000 bases de largo, dependiendo de dónde se insertó el didesoxi oligo. Estos millones de fragmentos se filtran a través de electroforesis capilar y un láser leerá la identidad del oligo en el punto de ruptura. Entonces, después de que cientos de miles de fragmentos se filtraron, desde el más grande en la parte superior de un gel hasta el más pequeño en la parte inferior de un gel, o períodos de tiempo más cortos o más largos para la electroforesis capilar, eventualmente podemos construir una imagen si nuestra exactitud secuencia, par de bases, por par de bases.
La electroforesis es un gradiente eléctrico que atrae partículas cargadas como el ADN a través de un medio de separación o polímero. La electroforesis capilar hace básicamente el mismo trabajo que la electroforesis en gel, es mucho más fácil de usar, los capilares son reutilizables y solo está limitado en la cantidad de secuencias diferentes que puede ejecutar a la vez por la cantidad de capilares contenidos en su secuenciador. Muchos de estos días tienen hasta 96 en un solo dispositivo, lo que permite un rendimiento de secuenciación extremadamente alto.
¡¡Gracias por leer!!
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-Ryan
