Bueno, la RT-PCR no es, en sí misma, semicuantitativa o cuantitativa. De hecho, la RT-PCR en sí misma es un ensayo de PCR cualitativo normal, único solo porque se enfoca en la expresión de ARN utilizando RT en ARN en lugar de Taq-pol en ADN. Al usar las técnicas de PCR cuantitativa (es decir, en tiempo real), se puede hacer una RT-PCR cuantitativa, a menudo llamada qRT-PCR o RRT-PCR, pero la técnica de RT-PCR no es, en sí misma, un ensayo cuantitativo. La RT-PCR regular simplemente prueba el ADN complementario en el punto final de la reacción, generalmente usando electroforesis, al igual que la PCR convencional.
qRT-PCR combinó las técnicas de RT-PCR (es decir, el uso de ARN y la transcriptasa inversa) con las técnicas de qPCR (es decir, etiquetar el material genético con matrices fluorescentes o sondas de ADN para que pueda ver la reacción en tiempo real). Esto es lo que hace El ensayo cuantitativo.
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En cuanto a por qué la versión cuantitativa del ensayo puede denominarse semicuantitativa en parte de la literatura, este es en realidad un problema común cuando se trata de PCR. Muchos científicos son reacios a aceptar el potencial de PCR como un ensayo cuantitativo, y muy a menudo se refieren a las técnicas qPCR como “semicuantitativas”. Puede encontrar que los términos cuantitativos y semicuantitativos se usan de manera bastante intercambiable en la literatura de qPCR.
Ahora, en cuanto a lo que RT-PCR tiene que ver con los genes domésticos, RT-PCR se trata de detectar la expresión génica. En lugar de simplemente amplificar el ADN como lo hace la PCR tradicional, utiliza la transcriptasa inversa viral para producir ADN a partir del ARN en la muestra y, por lo tanto, detecta cualitativamente la expresión génica mediante el uso del ADN complementario. La qRT-PCR se puede utilizar para determinar cuantitativamente la cantidad de expresión génica. Por lo tanto, RT-PCR no solo es aplicable con genes de mantenimiento. Se puede usar en cualquier lugar donde la expresión génica sea un tema de interés, pero dado que los genes de limpieza se expresan casi siempre en algún nivel. Son un tema de estudio común que utiliza, específicamente, qRT-PCR, ya que cuantificar su expresión en diferentes circunstancias es una buena manera de aprender más sobre cómo funcionan estos genes.
